[发明专利]SCA3基因CAG重复序列动态突变的引物及检测方法

说明书

本发明涉及生物检测技术领域，具体地说是SCA3基因CAG重复序列动态突变的引物及检测方法，其特征在于，famF向引物5’端带5’‑FAM荧光基团，反向引物3’端包含5个CTG重复，引物序列如下：SCA3‑famF：CCAGTGACTACTTTGATTCGTGAAACAATG；SCA3‑R：TCCTGATAGGTCCCCCTGCTGCTGCTGCTG。本发明同现有技术相比，检测速度快，整个实验流程下来，只需要4到5个小时；准确率高，重复次数误差为正负1次。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体地说是SCA3基因CAG重复序列动态突变的引物及检测方法。

背景技术

Spinocerebeller ataxia type 3(SCA3)是脊髓小脑共济失调三型，也被称为Machado-Joseph病(MJD)，是中枢神经系统发生病变的一系列遗传病的一种。同其他遗传性共济失调疾病一样，SCA3由于一种特定的基因缺陷而导致脑部和从脑部发送和接受信号的神经纤维中的神经细胞出现障碍而形成的。在SCA3中，由于神经细胞和神经纤维出现障碍，会导致小脑和相关的脑部区域出现退化。

而在SCA3相关的ATXN3基因中CAG会出现异常重复，基于此，可以尝试设计一种检测CAG重复状况的引物及方法，通过对重复数的确定，辅助判断相关疾病。

发明内容

本发明的目的是针对SCA3的CAG重复，专门设计了两条特异性的引物，使用这对引物采用TP PCR的方法对ATXN3的CAG重复序列进行检测。

为实现上述目的，设计一种SCA3基因CAG重复序列动态突变的引物，其特征在于，famF向引物5’端带5’-FAM荧光基团，反向引物3’端包含5个CTG重复，引物序列如下：

SCA3-famF：CCAGTGACTACTTTGATTCGTGAAACAATG；

SCA3-R：TCCTGATAGGTCCCCCTGCTGCTGCTGCTG。

一种如权利要求1所述引物的检测方法，其特征在于，采用如下步骤：

(1)、对提取的DNA进行PCR扩增；

(2)、对PCR扩增产物进行毛细管电泳；

(3)、数据分析；

——所述的PCR扩增采用如下步骤：

2.1、试剂配置：按DNA检测样本数量配置扩增反应液混合液，每份19ul分装，所述扩增反应液混合液中：2×PreMix ExTaq试剂用量10×nμl；浓度为10uM的SCA3-famF引物用量1×nμl；浓度为10uM的SCA3-R引物用量1×nμl；ddH₂O用量7×nμl；所述n＝检测样本数+1；

2.2、加样：在19ul扩增反应混合液中加入1ul DNA；

2.3、扩增：在PCR仪中先以95℃变性5分钟；再运行35次如下循环：95℃变性1分钟、65℃退火1分钟、72℃延伸2分钟；之后72℃延伸15分钟，4℃保存，完成PCR扩增程序；

——所述对PCR扩增产物进行毛细管电泳采用如下步骤：

3.1、样本稀释：对PCR扩增产物进行20倍和100倍样本稀释，分别在19ul的ddH₂O和99ul的ddH₂O中加入1ulPCR扩增产物；

3.2、配置上机混合液：取ABI GS500-LIZ内标和HIDI按1∶99的体积比混合后，取9ul混合液与与上述稀释后的PCR扩增产物1ul混合制成上机混合液；