[发明专利]一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的检测及质控方法

说明书

本申请公开一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的检测及质控方法，包括：步骤A：样本采集、保存及质控；步骤B：DNA提取；步骤C：文库构建；步骤D：文库浓度测定及保存；步骤E：上机测序；步骤F：结果分析；本申请提供的胎儿染色体非整倍体检测中DNA的检测及质控方法操作简单便利并且灵活，流程科学，标准明确，实践操作效果好。各环节标准严格清晰，高效严谨，进而实现对21三体综合征,18三体综合征和13三体综合征进行快速的产前辅助诊断。

技术领域

本发明属于无创产前筛查检测领域，具体是指一种胎儿染色体非整倍体 检测中DNA的检测及质控方法。

背景技术

生命体遗传信息的快速获得对于生命科学的研究有着十分重要的意义。 第一代测序仪对电泳分离技术的依赖，使其难以进一步提高分析的速度和并 行化程度，也难以通过微型化降低测序成本。经过不断的技术开发和改进， 21世纪初，以Roche454技术、illumina公司的GenomeAnalyzer技术和ABI 公司的Solid技术为标记的第二代测序技术诞生了。第二代技术大大降低了 测序成本，还大幅度提高了测序速度并保持了高准确性。其中，illumina公 司的第一台测序仪于2006年问世，之后开发出来一系列的测序仪，如Hiseq2000、Hiseq2500、Miseq、HiseqX等，在准确性、通量、成本和速度方 面表现更优秀，而使其成为全球使用量最大的第二代测序仪。在第二代测序 平台不断完善的同时，以对单分子DNA进行非PCR测序为主要特征的第三 代测序技术也初显端倪。但由于其关键技术问题尚待解决，目前还未得到广 泛应用。

唐氏综合征，又称21-三体综合征或者先天愚型，是由新生儿染色体异 常所引起的先天性疾病。唐氏综合征的发病概率大约在1/800～1/600，在小 儿三体型染色体疾病中占的比重最高，约为70％～80％，而且该病的发病率 会随着产妇生育年龄的增高而上升。产前诊断筛查对于筛查唐氏综合症是很 重要而且很有实用性的一部分，大家所熟知的产前诊断筛查方法主要是传统 的一些筛查方法，如羊膜腔穿刺抽取羊水、绒毛膜取样以及穿刺抽取脐带血 等方法。这些方法带有一定的创伤性，对孕妇和胎儿也会造成一定的危险，严重者甚至可能会带来流产的风险。而且，穿刺抽取羊水要在孕妇孕周达到 16周以后才能进行，因为孕周16周后胎儿才能达到一定的成熟度，易于检 测。如果此时诊断结果显示胎儿染色体异常，则已经错过了最佳的流产时期， 可能需要通过引产来解决，这大大增加了孕妇的痛苦且增加了并发症发生的 可能。

上世纪九十年代，有研究报道了孕妇的血液循环中有胎儿游离 DNA(cff-DNA)的存在，后来有研究也报道发现孕妇血浆中存在胎儿核糖核酸 (RNA)，这些重大的临床研究发现为无创性产前筛查胎儿染色体异常提供了 新的可能性。近年来无创性产前筛查诊断取得了巨大的突破和进展，胎儿游 离细胞已经成功地应用于非侵入性产前诊断胎儿性别和Rh血型鉴定，这些 重大的研究和成果都是建立在对母体血浆中cff-DNA序列测定的基础上实现 的。但是在孕妇血浆中，母源性游离DNA含量占整个游离DNA的绝大部分， cff-DNA只占孕妇血浆中游离DNA总量的3％～5％，所以传统的DNA提取 技术及PCR等方法难以对胎儿唐氏综合征进行准确的判断。

因此，高效、准确的检测判断胎儿染色体是否为非整倍体就显得极为重 要，同时也成为了无创产前筛查技术的关键。

按照目前现有的样本采集流方法，样本采集过程不标准，样品保存和质 控不合格、容易导致样本失效、采样量不够、血浆分离不彻底等问题，影响 检测各环节的成功率。

因此，如何研发一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的检测及质控方 法，能够解决上述问题，便成为亟待解决的技术问题。

发明内容