[发明专利]一种单分子水平同时区分单碱基错配的方法

权利要求书

1.一种单分子水平同时区分单个碱基错配的方法，其特征在于，所述单分子水平同时区分单个碱基错配的方法包括：结合纳米孔电化学技术确定非标记的共臂型分子信标；依据分子信标引起的单个目标分子穿孔行为的特征阻断时间，发展单分子策略同时区分完全互补和单碱基错配的序列；

所述单分子水平同时区分单个碱基错配的方法包括以下步骤：

步骤一，结合纳米孔电化学技术，确定非标记的共臂型分子信标；设计茎部长度为3个碱基对的分子信标，其茎部的两臂既参与发夹的形成又参与目标分子的杂化；在3'末端增加9个寡聚核苷酸链引导分子信标的穿孔并增加穿孔事件的频率；

步骤二，分子信标加入纳米孔cis端溶液中，记录单通道电流信号；电压驱动下分子信标穿过纳米孔，产生阻断时间极短的电流阻断信号；

步骤三，将完全互补和单碱基错配的序列同时加入含有共臂分子信标的溶液中混合杂化后加入纳米孔cis端溶液中，记录单通道电流信号；

步骤四，在电压驱动下穿过纳米孔时产生阻断时间明显延长的两种不同阻断信号，阻断时间相对较长，对应于完全互补的双链体；阻断时间相对较短，对应于含单碱基错配的双链体；

所述单分子水平同时区分单个碱基错配的方法得到的非标记的共臂型分子信标在识别靶序列时信背比～10⁴。