[发明专利]一种用于人类Rh血型23个基因位点的基因分型检测试剂盒

说明书

本发明属于人核酸体外检测技术领域，具体涉及人类5号、19号、21号及X/Y染色体23个基因位点的基因分型检测试剂盒。本发明首先设计了对分布于人类5号、19号、21号及X/Y染色体上的23个基因位点同时进行基因分型的复合PCR扩增系统，其中PCR扩增引物组为：SEQ ID No.1～SEQ ID No.53；本发明的基因分型检测试剂盒包括引物组合物容器、PCR反应母液容器；引物组合物容器包含引物SEQ ID No.1～SEQ ID No.53组合物贮存液。本发明实现了对23个基因位点的单管扩增，各荧光通道内以及不同荧光通道内的基因位点扩增均衡，分型图谱良好；而且可显著节省成本、人力和时间，提高工作效率。

技术领域

本发明属于人核酸体外检测技术领域，具体涉及对人基因组DNA中具有多态性的基因位点的基因型的检测，具体涉及一个采用多重聚合酶链式反应对人类5号、19号、21号及X/Y染色体上23个基因位点进行Rh血型基因分型检测的试剂盒。

背景技术

根据Rh因子的有无可以区分Rh阴性和Rh阳性两种血型，这种血型系统称为Rh血型系统。Rh是恒河猴(Rhesus Macacus)外文名称的头两个字母。兰德斯坦纳等科学家在1940年做动物实验时，发现恒河猴和多数人体内的红细胞上存在Rh血型的抗原物质，故而命名的。凡是人体血液红细胞上有Rh凝集原者，为Rh阳性。反之为阴性。

Rh血型系统是人类红细胞血型系统中最具多态性的血型系统，它具有高度的免疫源性，是仅次于ABO血型的重要血型系统，具有重要的临床意义。目前能识别的Rh系统抗原有40余种，但临床常见的抗原有5中，依据其抗原性从强至弱依次为DCEce，其中D抗原存在与否常被用来表示Rh阳性或阴性，写作Rh(D)+或Rh(D)-，字母D加小括号表示抗原(不加小括号时应写作斜体表示相应的基因)。在Rh(D)阴性人群的临床输血治疗和母胎免疫引起的新生儿溶血中具有重要的意义。我国汉族人群中的Rh(D)阴性者比例约为0.3-0.5％，但在部分少数民族人群中Rh(D)阴性者比例可以高达10％。国外文献报道在高加索人群中Rh(D)阴性者比例可以高达10-18％。

近年来，随着编码Rh蛋白的RhD和RhCE基因被克隆、测序，在Rh血型系统分子遗传机理的研究和Rh血型的分型检测方面取得了重大的进展。通过Southern杂交分析，已经确定了Rh“基因座”由两个同源结构基因构成：一个编码Rh(D)多肽，另一个编码(CcEe)多肽。研究发现1条单一的RhCE的cDNA转到K562细胞后，这一全长肽链既可表达E/e和C/c抗原。RhD和RhCE基因具有高度同源性，二者的核苷酸序列仅有约7％的差异，学者认为这可能是起源于共同祖先基因的重复作用。

RhD的遗传多态性复杂而丰富，包括RhD基因的完全缺失、RhD基因的部分缺失、基因的点突变和RhDΨ假基因等；Rh(D)抗原不仅遗传机制多样，Rh(D)抗原还存在多种变异体，包括弱D型、部分D型和其他D弱表现型，目前已至少明确42种弱D型和6个类别的部分D。国内外多名学者发现用血型血清学方法误将弱D型供者血输给Rh(D)阴性受者产生原发性抗-D的案例，也有较多因部分D免疫产生抗D抗体的报道15-20。高加索人群的研究调查发现在RhD基因缺失导致的Rh(D)阴性人群中占绝大部分，仅有0.2-1％的高加索人群表现为弱D型，其中约95％为弱DI-IV型。而国内因缺少成熟的检测方法，国内人群Rh血型分子背景和人群分布尚缺少系统研究，但有研究指出中国的Rh血型遗传机制多样而复杂，中国不同地区的研究中发现中国Rh(D)阴性人群仅有约50％为RhD基因缺失导致，有约20-30％的为放散型，其中超过95％为1227GA的突变，剩余约有10-20％为弱D表现型，其中60％以上为弱D中的弱D15型，30％以上为部分D中的DVI Type3型。