[发明专利]一种活血化瘀中药制剂的抗氧化活性检测方法及应用

权利要求书

1.一种活血化瘀中药制剂的抗氧化活性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤a、用25～75％v/v甲醇超声提取所述活血化瘀中药制剂，得样品溶液，备用；

步骤b、取1,1-二苯基-2-三硝基苯肼，用纯甲醇溶解，得1,1-二苯基-2-三硝基苯肼甲醇工作溶液，备用；

步骤c、取所述样品溶液与所述1,1-二苯基-2-三硝基苯肼甲醇工作溶液混合，得待测溶液，其中所述1,1-二苯基-2-三硝基苯肼甲醇工作溶液中的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼与所述样品溶液中所述活血化瘀中药制剂的质量比为0.3：1～5；

步骤d、取所述样品溶液与25～75％v/v甲醇溶液混合，得空白溶液，其中所述样品溶液与所述甲醇溶液的体积比与步骤c中所述待测溶液中所述样品溶液与所述1,1-二苯基-2-三硝基苯肼甲醇工作溶液的体积比相等；

步骤e、取所述1,1-二苯基-2-三硝基苯肼甲醇工作溶液与25～75％v/v甲醇溶液混合，得对照溶液，其中所述甲醇溶液与所述1,1-二苯基-2-三硝基苯肼甲醇工作溶液的体积比与步骤c中所述待测溶液中所述样品溶液与所述1,1-二苯基-2-三硝基苯肼甲醇工作溶液的体积比相等；

步骤f、用酶标仪检测所述待测溶液、空白溶液、对照溶液的吸光度，检测波长为500～520nm；

步骤g、计算所述活血化瘀中药制剂的清除率，计算公式为

SR_样品＝[1－(OD_药物－OD_空白)/OD_对照]×100％，其中SR_样品为所述待测溶液的清除率，OD_药物为所述待测溶液的吸光度，OD_空白为所述空白溶液的吸光度，OD_对照为所述对照溶液的吸光度；

步骤h、以Vc为内标物，用内标法对步骤g的测定结果进行校正，以SR_样品/SR_VC表示所述活血化瘀中药制剂的抗氧化活性，其中SR_VC为Vc的清除率。

2.根据权利要求1所述的活血化瘀中药制剂的抗氧化活性检测方法，其特征在于，步骤a中所述超声提取中，提取每20mg所述活血化瘀中药制剂使用的所述甲醇＞1mL。

3.根据权利要求1所述的活血化瘀中药制剂的抗氧化活性检测方法，其特征在于，步骤a中所述超声提取的时间为5～15min。

4.根据权利要求1所述的活血化瘀中药制剂的抗氧化活性检测方法，其特征在于，步骤a中所述超声提取还包括超声提取后离心，所述离心为14000rpm离心10min。

5.根据权利要求1所述的活血化瘀中药制剂的抗氧化活性检测方法，其特征在于，步骤a中所述样品溶液中所述活血化瘀中药制剂的含量为1～5mg/mL。

6.根据权利要求1所述的活血化瘀中药制剂的抗氧化活性检测方法，其特征在于，步骤f中所述检测波长为512nm。

7.根据权利要求1所述的活血化瘀中药制剂的抗氧化活性检测方法，其特征在于，步骤f中所述用酶标仪检测所述待测溶液、空白溶液、对照溶液的吸光度的具体操作为：每45s读数一次，连续记录45min，取读数变化不超过5％的OD值作为最终OD值，用于计算所述抗氧化活性。

8.根据权利要求1所述的活血化瘀中药制剂的抗氧化活性检测方法，其特征在于，步骤f中所述用酶标仪检测时的温度为37℃，检测过程中多孔板为密封状态。

9.根据权利要求1所述的活血化瘀中药制剂的抗氧化活性检测方法，其特征在于，步骤f中所述用酶标仪检测时的摇动频率为50Hz。

10.根据权利要求1～9任一项所述检测方法作为血府逐瘀胶囊抗氧化活性检测方法的应用。