[发明专利]一种骨靶向性鲑鱼降钙素及其制备方法

说明书

本发明提供了一种骨靶向性鲑鱼降钙素，是将鲑鱼降钙素分子中的二硫键打开并与骨靶向性偶联分子共价偶联形成，制备方法如下：(1)制备骨靶向性偶联分子，(2)将鲑鱼降钙素溶解于pH值为5～7的水溶性溶剂中，加入还原剂将鲑鱼降钙素的二硫键还原形成自由巯基，然后加入骨靶向性偶联分子，在0～40℃搅拌反应0.5～12h，将粗产物分离，采用制备型液相色谱纯化，即得骨靶向性鲑鱼降钙素。本发明提供的骨靶向性鲑鱼降钙素不具有细胞毒性和免疫原性，能提高降钙素的骨组织富集能力，可有效修复骨组织，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种骨靶向性鲑鱼降钙素及其制备方法。

背景技术

鲑鱼降钙素(Salmon calcitonin，sCT)是一种含有32个氨基酸的单链多肽类激素，能够调节血液中的钙离子浓度，减少骨吸收，并有明确的止痛作用。随着年龄的增长，人自身脏器逐渐衰老，降钙素和其他相关激素分泌的能力会大大降低，导致骨量减少，骨结构紊乱，抑制骨吸收的能力下降，逐步发展成骨质疏松症。目前用于治疗绝经后妇女骨质疏松症的药物多为降钙素类蛋白质及多肽药物，而且需要长期用药。

在外源性给予降钙素的治疗过程中，由于降钙素的半衰期非常短，会迅速从体内清除致使药效难以发挥到极致，导致其全身生物利用度较低。同时，由于人体骨骼仅占总体重的4％～5％，传统的药物递送系统仅会将一小部分sCT输送到骨骼部位达到治疗效果。sCT虽然与破骨细胞上的降钙素受体(CTR)相互作用而达到其抗吸收作用。但是CTR也广泛分布在非骨骼组织中。研究发现，已经证实可以与降钙素高亲和力结合的组织有：肾脏，脑，肺部，胎盘，卵巢，睾丸和精子等等。因此，如果全身施用药物而不特异性地靶向骨组织，这样的治疗方案会使得sCT药物在这些组织的CTR中存在竞争，这会进一步降低破骨细胞的sCT可利用性。采用骨靶向性分子可以改善sCT靶向、定位和骨保留，有望提高sCT的疗效，同时降低含有CTR的非骨位点的药物浓度。

通过对降钙素进行改性增加功能基团是改善降钙素骨靶向性的手段之一。现有技术大多采用对降钙素氨基酸序列中的赖氨酸残基进行偶联改性，但是由于可结合的位点较多，通常会得到混合物(参见M.W.Jones,etc.,Chemical Communications 35(35)(2009)5272-5274；D.Samanta,etc.,Biomacromolecules 9(10)(2008)2891-2897；K.H.Bhandari,etc.,International Journal of Pharmaceutics 394(1–2)(2010)26-34.)。通过乙酰化修饰鲑鱼降钙素(sCT)的Lys-11和Lys-18会导致生物效能的显着降低，因此不能通过氨基进行sCT衍生化(参见S.M.Ryan,etc.,Journal of Controlled Release 149(2)(2011)126-132；G.Andreotti,etc.,Journal of Biological Chemistry 281(34)(2006)24193-203.)。研究已经证明Gln-14可以使转谷氨酰胺酶被衍生化而不丧失活性，然而该方法并不是一种通用方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种骨靶向性鲑鱼降钙素，以在不降低鲑鱼降钙素生物效能的基础上有效提高其骨靶向性，同时为鲑鱼降钙素的骨靶向改性提供一种通用方法。

本发明提供的骨靶向性鲑鱼降钙素，是将鲑鱼降钙素分子中的二硫键打开并与骨靶向性偶联分子共价偶联形成，该骨靶向性鲑鱼降钙素的结构式如式(Ⅰ)所示，

式(Ⅰ)中，R＝n为2～9中的整数。

本发明还提供了一种上述骨靶向性鲑鱼降钙素的制备方法，步骤如下：

(1)制备骨靶向性偶联分子