[发明专利]一种骨靶向性鲑鱼降钙素及其制备方法

权利要求书

1.一种骨靶向性鲑鱼降钙素，其特征在于是将鲑鱼降钙素分子中的二硫键打开并与骨靶向性偶联分子共价偶联形成，该骨靶向性鲑鱼降钙素的结构式如式(Ⅰ)所示，

式(Ⅰ)中，n＝5，或n为2～5的整数。

2.一种骨靶向性鲑鱼降钙素的制备方法，其特征在于步骤如下：

(1)制备骨靶向性偶联分子

①将二取代马来酰亚胺和N-甲基吗啉溶解于乙酸乙酯中，避光加入氯甲酸甲酯，搅拌反应0.5～6h，分离出粗产物，将粗产物溶于二氯甲烷，用水洗涤，分离出有机相，干燥除去有机相中的水，然后除去二氯甲烷，得到第一中间体；

二取代马来酰亚胺与N-甲基吗啉的摩尔比为1:(1～1.5)，氯甲酸甲酯的加入量为二取代马来酰亚胺的摩尔量的1～1.5倍；

②将第一中间体溶解于二氯甲烷中，加入三乙胺和甘氨酸叔丁酯反应0.5～6h，除去二氯甲烷，将所得粗产物通过柱层析纯化，得到第二中间体，对第二中间体进行叔丁基脱保护，得到第三中间体；第一中间体与甘氨酸叔丁酯的摩尔比为1:(1～1.5)，三乙胺与第一中间体的摩尔比为1:(1～3)；

③将第三中间体、N-甲基吗啉和1-羟基苯并三唑加入N,N-二甲基甲酰胺中进行搅拌，在冰浴、通氩气条件下加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，持续通氩气0.5～2h后加入羧基保护的天冬氨酸寡肽或者羧基保护的谷氨酸寡肽，然后在冰浴条件下继续搅拌反应20～30h，冷冻干燥，透析，冷冻干燥，得到第四中间体，对第四中间体进行叔丁基脱保护即得骨靶向性偶联分子；

第三中间体、N-甲基吗啉与1-羟基苯并三唑的摩尔比为0.5:(1～1.5):(1.5～2)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的加入量为第三中间体摩尔量的3～4倍，羧基保护的天冬氨酸寡肽或者羧基保护的谷氨酸寡肽的加入量为第三中间体的摩尔量的1～1.5倍；

所述天冬氨酸寡肽为天冬氨酸三肽、天冬氨酸四肽、天冬氨酸五肽或天冬氨酸六肽，谷氨酸寡肽为谷氨酸六肽；

(2)制备骨靶向性鲑鱼降钙素

将鲑鱼降钙素溶解于pH值为5～7的水溶性溶剂中，加入还原剂将鲑鱼降钙素的二硫键还原形成自由巯基，然后加入骨靶向性偶联分子，在0～40℃搅拌反应0.5～12h，将粗产物分离，采用制备型液相色谱纯化，即得骨靶向性鲑鱼降钙素；还原剂和骨靶向性偶联分子的加入量均为鲑鱼降钙素摩尔量的1～1.5倍。

3.根据权利要求2所述骨靶向性鲑鱼降钙素的制备方法，其特征在于，所述二取代马来酰亚胺为二溴马来酰亚胺、二硫苯基马来酰亚胺或二氧苯基马来酰亚胺。

4.根据权利要求2所述骨靶向性鲑鱼降钙素的制备方法，其特征在于，所述还原剂为2-巯基乙醇、二硫苏糖醇或三(2-羧乙基)膦盐酸盐。

5.根据权利要求2所述骨靶向性鲑鱼降钙素的制备方法，其特征在于，步骤(1)①中将二取代马来酰亚胺和N-甲基吗啉溶于乙酸乙酯中使二取代马来酰亚胺的浓度为1～5mg/mL，步骤(1)②中将第一中间体溶解于二氯甲烷中使第一中间体的浓度为20～40mg/mL，步骤(1)③中将第三中间体、N-甲基吗啉和1-羟基苯并三唑加入N,N-二甲基甲酰胺中使第三中间体的浓度为2～10mg/mL。

6.根据权利要求2所述骨靶向性鲑鱼降钙素的制备方法，其特征在于，步骤(2)中将鲑鱼降钙素溶解于pH值为5～7的水溶性溶剂中使鲑鱼降钙素的浓度为0.1～0.5mmol/L。

7.根据权利要求2所述骨靶向性鲑鱼降钙素的制备方法，其特征在于，所述pH值为5～7的水溶性溶剂为PBS缓冲液。

8.根据权利要求2所述骨靶向性鲑鱼降钙素的制备方法，其特征在于，步骤(1)②中采用柱层析纯化粗产物时，采用的柱填料为硅胶，洗脱溶剂为乙酸乙酯与石油醚的混合液，乙酸乙酯与石油醚的体积比为(3～4):10。

9.根据权利要求2所述骨靶向性鲑鱼降钙素的制备方法，其特征在于步骤(2)中采用制备型液相色谱纯化粗产物时，采用的色谱柱为C-18制备色谱柱，流动相为0.1wt％～0.15wt％的三氟乙酸水溶液。