[发明专利]吡咯-2-羧酸的提取方法

说明书

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种吡咯‑2‑羧酸的提取方法。包括如下步骤：将海洋细菌Arenibactersp.6A1接种到发酵培养基中进行发酵培养，得到发酵液；调节所述发酵液至pH＝3～4，然后进行萃取处理得到萃取物；将所述萃取物溶解，依次进行凝胶柱层析和HPLC分离，得到吡咯‑2‑羧酸；其中，所述HPLC分离的条件包括：用甲醇/水混合溶剂进行梯度洗脱，检测波长为254nm，收集液相峰的时间为23.05min。该方法最终得到了高纯度、具有抑菌活性的吡咯‑2‑羧酸，为吡咯‑2‑羧酸的工业化生产提供很好的基础。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种吡咯-2-羧酸的提取方法。

背景技术

随着有害病菌耐药性问题越来越严重，对新型有效的抗菌类活性物质的开发愈显重要。从陆栖微生物中探索新型活性物质的难度越来越大，相对而言，海洋因其环境多样性和特殊性，成为更具发展前景的探索目标。

海洋来源的细菌能产生各种具有抗菌活性的物质。研究较多的菌种有芽孢杆菌属Bacillus sp.、弧菌属Vibrio sp.、假单胞菌属Pseudomonassp.、黄杆菌属Flavobacteriumsp.等。李厚金等从大亚湾来源的假单胞菌属细菌中分离获得灵菌红素，其在体外能有效抑制革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌)和病原真菌(白色念珠菌、近平滑念珠菌和隐球酵母菌)的生长；Tareq等报道了从海洋芽孢杆菌属(Bacillus sp.109GGC020)中分离得到的4种新型脂肽化合物gageopeptides A～D，该类化合物对1对金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌及铜绿假单胞菌等细菌显示出中等抗菌活性(MIC＝8～64μg/ml)。

Arenibacter属于拟杆菌门(Bacteroidetes)黄杆菌科(Flavobacteriaceae)的革兰氏阴性菌，该属细菌目前文献报导全部采集自海洋环境，来源包括海洋底泥、褐藻(Chorda filum)、绿藻(Ulvafenestrata)以及可食用海参(Apostichopusjaponicus)。文献报导Arenibacter能够合成多种特殊的糖苷酶，特别是高活性的beta-N-乙酰-氨基葡萄糖苷酶以及alpha-N-乙酰半乳糖苷酶。Tony Gutierrez等从实验室培养的硅藻(Skeletonemacostatum)培养液中分离得到7株Arenibacter属菌，发现全部能够降解菲(phenanthrene)，除一株Arenibacterlatericius KCTC 12957^T外，全部能够降解萘(naphthalene)，因此认为降解多环芳烃可以作为该属菌株的鉴别特征之一。高昊等从中国南海底泥来源的一株Arenibacter属菌(Arenibacternanhaiticus sp.nov.NH36AT)中分离得到了一系列苯乙胺类化合物，该类化合物具有微弱的抗金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌的活性(MIC 0.50 and 0.25mg/ml)。

吡咯-2-羧酸(pyrrole-2-carboxylic acid,PCA)具有一定的抑菌活性，如对绿脓杆菌和部分植物致病细菌生长的抑制作用，因此其应用前景非常广阔。但现有技术中，从微生物发酵液中提取吡咯-2-羧酸的技术非常有限。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种吡咯-2-羧酸的提取方法，旨在解决现有吡咯-2-羧酸的提取技术非常有限的技术问题。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种吡咯-2-羧酸的提取方法，包括如下步骤：

将海洋细菌Arenibactersp.6A1接种到发酵培养基中进行发酵培养，得到发酵液；

调节所述发酵液至pH＝3～4，然后进行萃取处理得到萃取物；

将所述萃取物溶解，依次进行凝胶柱层析和HPLC分离，得到吡咯-2-羧酸；