[发明专利]吡咯-2-羧酸的提取方法在审
| 申请号: | 201810454302.4 | 申请日: | 2018-05-14 |
| 公开(公告)号: | CN108558727A | 公开(公告)日: | 2018-09-21 |
| 发明(设计)人: | 王立岩;伍嘉慧;李晓帆;林培玲 | 申请(专利权)人: | 深圳大学 |
| 主分类号: | C07D207/34 | 分类号: | C07D207/34;C12P17/10;A01N43/36;A01P1/00;A01P3/00;C12R1/01 |
| 代理公司: | 深圳市恒申知识产权事务所(普通合伙) 44312 | 代理人: | 王利彬 |
| 地址: | 518060 广东*** | 国省代码: | 广东;44 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 吡咯 羧酸 发酵液 萃取物 微生物技术领域 发酵培养基 凝胶柱层析 水混合溶剂 发酵培养 海洋细菌 梯度洗脱 抑菌活性 萃取处理 高纯度 收集液 波长 甲醇 接种 溶解 检测 | ||
1.一种吡咯-2-羧酸的提取方法,其特征在于,包括如下步骤:
将海洋细菌Arenibactersp.6A1接种到发酵培养基中进行发酵培养,得到发酵液;
调节所述发酵液至pH=3~4,然后进行萃取处理得到萃取物;
将所述萃取物溶解,依次进行凝胶柱层析和HPLC分离,得到吡咯-2-羧酸;
其中,所述HPLC分离的条件包括:用甲醇/水混合溶剂进行梯度洗脱,检测波长为254nm,收集液相峰的时间为23.05min。
2.如权利要求1所述的吡咯-2-羧酸的提取方法,其特征在于,所述海洋细菌Arenibacter sp.6A1接种到发酵培养基之前,先在2216E固体培养基上经复苏处理。
3.如权利要求1所述的吡咯-2-羧酸的提取方法,其特征在于,所述发酵培养基为2216E液体培养基。
4.如权利要求1所述的吡咯-2-羧酸的提取方法,其特征在于,所述发酵培养的条件为:转速180rpm,温度28℃,时间96h。
5.如权利要求1所述的吡咯-2-羧酸的提取方法,其特征在于,所述萃取处理的步骤包括:以乙酸乙酯为萃取剂,对所述发酵液进行萃取,然后在低于50℃下旋转蒸干,得到乙酸乙酯层的所述萃取物。
6.如权利要求5所述的吡咯-2-羧酸的提取方法,其特征在于,所述萃取处理的步骤重复三次。
7.如权利要求1所述的吡咯-2-羧酸的提取方法,其特征在于,所述凝胶柱层析为Sephadex LH20柱层析。
8.如权利要求7所述的吡咯-2-羧酸的提取方法,其特征在于,所述Sephadex LH20柱层析的步骤包括:将所述萃取物用甲醇溶解,然后以氯仿:甲醇=1:1为洗脱溶剂进行等梯度洗脱,先后共得8个等体积的馏份:G3-A、G3-B、G3-C、G3-D、G3-E、G3-F、G3-G和G3-H。
9.如权利要求8所述的吡咯-2-羧酸的提取方法,其特征在于,所述HPLC分离包括:将所述G3-H的馏份浓缩蒸干,溶于甲醇后,用甲醇/水混合溶剂进行梯度洗脱。
10.如权利要求1-9任一项所述的吡咯-2-羧酸的提取方法,其特征在于,所述HPLC分离中,梯度洗脱的时间为30min,流速为1mL/min。
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