[发明专利]一种从人体血液中性粒细胞的嗜天青颗粒中分离纯化天然蛋白酶3的方法

权利要求书

1.一种从人体血液中性粒细胞的嗜天青颗粒中分离纯化天然蛋白酶3的方法，其特征在于：步骤包括：S1、研磨、溶解：将嗜天青颗粒细胞组织研磨均匀，高速离心去除不溶解杂质获得过柱起始蛋白溶液；S2、阳离子交换层析：将起始蛋白溶液负载于阳离子交换柱层析柱中，使用梯度盐度层析洗脱方式进行洗脱，得到初级纯化蛋白样品；S3、染色配体层析：将初级纯化蛋白样品再通过染色配体层析柱进一步洗脱去除杂质，得到二级纯化蛋白溶液；S4、分子筛层析：将二级纯化蛋白溶液通过分子筛层析柱进一步洗脱分离蛋白酶3抗原，分馏收集洗脱液得到三级纯化蛋白溶液；S5、亲和层析：经过亲和层析柱将三级纯化蛋白溶液中的杂蛋白进一步洗脱剔除，得到最终成品；

步骤S2中，所述阳离子交换柱层析柱中采用的层析缓冲液为20-50mM醋酸钠,pH5.4-5.6,0.02-0.05％Lubrol；依次采用洗脱缓冲液1和洗脱缓冲液2进行梯度盐度层析洗脱，所述洗脱缓冲液1为20-50mM醋酸钠,pH5.4-5.6,0.02-0.05％Lubrol,0-0.3M NaCl，所述洗脱缓冲液2为20-50mM醋酸钠,pH5.4-5.6,0.02-0.05％Lubrol,0.4-0.6M NaCl；

步骤S3中，所述染色配体层析柱中采用的层析缓冲液为20-50mM醋酸钠,pH5.4-5.6,0.02-0.05％Lubrol，所述洗脱采用的洗脱缓冲液为20-50mM醋酸钠,pH5.4-5.6,0-2MNaCl,0.02-0.05％Lubrol；

步骤S4中，所述洗脱采用的洗脱缓冲液为15-25mM Hepes-NaOH,pH 7.5-8.5，0.02-0.05％Lubrol,0.1-0.5M NaCl；

步骤S5中，所述洗脱采用的洗脱缓冲液为15-25mM Hepes-NaOH,pH 7.5-8.5，0.02-0.05％Lubrol,0.1-0.5M NaCl。

2.如权利要求1所述的从人体血液中性粒细胞的嗜天青颗粒中分离纯化天然蛋白酶3的方法，其特征在于：步骤S1中，所述嗜天青颗粒细胞组织采用以下方法得到：采用PBS缓冲液洗脱原材料中的白细胞，洗脱液离心，弃上清保留下层细胞层，向细胞层中加入细胞裂解液后离心，取下层沉淀，即得嗜天青颗粒细胞组织。

3.如权利要求1所述的从人体血液中性粒细胞的嗜天青颗粒中分离纯化天然蛋白酶3的方法，其特征在于：步骤S1中，采用电动玻璃均浆器研磨并溶解嗜天青颗粒细胞组织；所述高速离心为转速14000～16000rpm下离心25～35分钟。