[发明专利]杀香鱼假单胞菌DNA疫苗、制备方法及其应用

说明书

本发明公开一种杀香鱼假单胞菌DNA疫苗、制备方法及其应用，其特征在于：该疫苗为pCI‑pcrV。该疫苗以杀香鱼假单胞菌NB2011基因组DNA为模板，经引物P1/P2进行PCR扩增，扩增产物经纯化后与质粒pCI‑neo连接，获得重组质粒pCI‑pcrV，即为杀香鱼假单胞菌DNA疫苗；其中靶基因pcrV为SEQ ID NO：1所示的序列。本发明的疫苗对杀香鱼假单胞菌感染的免疫保护率达70％以上，因此具有较高的保护率，本发明的疫苗在免疫后的8周内的免疫保护率没有明显减弱，因此具有长效优势。

技术领域

本发明涉及分子生物学及免疫学领域，具体的说是一种杀香鱼假单胞菌DNA疫苗的构建及其应用即杀香鱼假单胞菌DNA疫苗、制备方法及其应用。

背景技术

杀香鱼假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)是大黄鱼内脏白点病的病原菌，该菌感染在近十年来造成了大黄鱼养殖产业的严重损失。该菌引起的内脏白点病外观无明显症状，只是在疾病发展的后期内脏器官如脾脏、肾脏等出现大小不一的白色结节，一般在冬春低水温季节发生，鱼类基本不摄食，无法通过投喂口服药物等常规方法有效控制病情，免疫预防可能是控制该病的重要途径。

浙江省象山港分离致病菌P.plecoglossicida NB2011编码一套典型的三型分泌系统(T3SS)，通过形成针状复合体向宿主细胞注射效应蛋白，是重要的毒力因子；V-抗原是T3SS针形注射器头部的重要结构成份，是该系统分泌效应蛋白不可或缺的，在铜绿假单胞菌和耶尔森氏菌中已被验证是重要的保护性抗原，可激发宿主产生保护性免疫，针对此抗原研制疫苗可能获得重大进展。但是，目前杀香鱼假单胞菌疫苗的研究尚未全面展开，DNA疫苗方面的尝试未有报道。

发明内容

本发明针对现有技术的上述不足，提供一种能有效控制杀香鱼假单胞菌感染，免疫保护率高，且免疫持续时间长的杀香鱼假单胞菌DNA疫苗。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种杀香鱼假单胞菌DNA疫苗，该疫苗为pCI-pcrV。

本发明上述的杀香鱼假单胞菌DNA疫苗，该疫苗以杀香鱼假单胞菌NB2011基因组DNA为模板，经引物P1/P2进行PCR扩增，扩增产物经纯化后与质粒pCI-neo连接，获得重组质粒pCI-pcrV，即为杀香鱼假单胞菌DNA疫苗；

所述引物序列为：

P1:5’-GGAATTCATGGCAAGGATCGAAGAGG-3’，

P2:5’-GCGTCGACCTACCCTAAAGCGGTTTTCAG-3’；

所述靶基因pcrV为SEQ ID NO：1所示的序列，具体为：