[发明专利]一种油菜转基因成分的检测方法

说明书

本发明公开了一种油菜转基因成分的检测方法，包括以下步骤：确定转基因成分、内源标准基因和外源标准基因；制备多重扩增引物；进行抽样并混合，得到混合样品；提取混合样品的基因组并加入外源标准基因，得到混合核酸；构建高通量测序文库；对高通量测序文库进行高通量测序，得到测序片段组；获得待测样品中转基因成分的测序片段的数量；待检样品DNA在引物、Bst DNA聚合酶存在的条件下进行恒温扩增反应；根据外源标准基因的测序片段的数量，判断实验是否成功并计算待测样品种中转基因成分的含量；根据转基因成分的含量判断待测样品中是否含有转基因成分。本发明能够同时定量检测待测样品中的任意多种转基因成分。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体为一种油菜转基因成分的检测方法。

背景技术

油菜是我国主要作物，油菜转基因技术与产品均已成熟，需要对转基因油菜的推广进行监管，转基因成分检测是转基因监管的技术支撑。现有的转基因成分检测技术主要检测核酸或蛋白质，其中，基于核酸的检测方法主要流程为：提取待测样品中的核酸，利用PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶链反应)的方法扩增样品中的转基因成分，利用实时定量、琼脂糖电泳或芯片技术检测转基因成分是否存在。

转基因成分多种多样，而现有技术一次只能检测其中一种或少数几种，因此，需要对可能的多种转基因成份逐一进行检测，才能确定为“非转基因”产品；一般检测的是共转化的转基因成分，而不是外源基因本身，因此，对于无标记转基因来说，采用现有的检测方法进行检测会失效；检测基本上是定性检测，但定量检测又有其现实需求，例如，相邻田块的转基因油菜品种的少量花粉被传到了非转基因品种上，在定性检测时，非转基因品种将被误判为转基因品种。

发明内容

本发明提供一种油菜转基因成分的检测方法，可以有效解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种油菜转基因成分的检测方法，包括以下步骤：

S1、确定待测样品中需要检测的转基因成分、所述待测样品中的内源标准基因和所述待测样品的外源标准基因，所述待测样品为油菜植株或所述油菜植株的一部分；

S2、制备用于扩增所述转基因成分、所述内源标准基因和所述外源标准基因的测试区域的多重扩增引物；

S3、对所述待测样品进行抽样并混合，得到混合样品；

S4、提取所述混合样品的基因组；

S5、向所述混合样品的基因组中加入所述外源标准基因，得到混合核酸；

S6、利用所述多重扩增引物对所述混合核酸进行扩增，得到扩增产物，利用所述扩增产物构建高通量测序文库；

S7、对所述高通量测序文库进行高通量测序，得到测序片段组；

S8、分析所述测序片段组，获得所述待测样品中所述转基因成分的测序片段的数量、所述内源标准基因的测序片段的数量和所述外源标准基因的测序片段的数量；

S9、待检样品DNA在引物、Bst DNA聚合酶存在的条件下进行恒温扩增反应；

S10、结合所述外源标准基因的测序片段的数量以及根据扩增结果判断待检样品中是否存在转基因成分，判断实验是否成功；

S11、若所述实验成功，则计算所述待测样品种中所述转基因成分的含量；

S12、根据所述转基因成分的含量判断所述待测样品中是否含有转基因成分。

进一步的，所述转基因成分为外源功能基因、抗性标记基因、启动子、终止子和外源插入旁侧序列中的至少一种。

进一步的，所述内源标准基因为所述待测样品的基因组中的单拷贝基因。