[发明专利]咔唑类荧光胺类化合物标记试剂、合成和应用

说明书

本发明涉及咔唑类荧光胺类化合物标记试剂、合成和应用，该试剂以咔唑环为荧光母体环，氯甲酸酯为反应活性基团，其合成步骤简单方便，易于实现，两步反应即可完：(1)将咔唑与4‑溴苄醇进行反应，得到中间体(4‑(9H‑咔唑‑9‑基)苯基)甲醇；(2)将中间体(4‑(9H‑咔唑‑9‑基)苯基)甲醇与固体光气反应，得到目标产物(4‑(9H‑咔唑‑9‑基)苯基)甲氧酰氯。本发明所述新型的稳定咔唑类荧光胺类化合物标记试剂可以快速、准确、灵敏地标记脂肪胺类化合物，从而实现复杂体系中微量、痕量脂肪胺类化合物的分离与检测，可用于生命分析、环境分析、食品分析等研究领域中多种胺类化合物的荧光标记与分析，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于有机小分子胺类标记技术领域，具体涉及一种新型的稳定咔唑类荧光胺类化合物标记试剂及其合成方法与应用，并以脂肪胺为例对本发明的应用与效益进行说明。

背景技术

脂肪胺广泛分布于自然界中，由于反应活性高、毒性大而成为食品安全检测和环境监测的重要研究对象。快速准确地测定脂肪胺类化合物对生物学、毒物学、环境化学和临床医学具有重要意义。但是脂肪胺类化合物通常紫外吸收很弱甚至无紫外吸收，更不具备荧光发光性质，因此要提高该类化合物的检测灵敏度，化学荧光衍生技术是一个有效途径。在化学荧光衍生-高效液相色谱荧光检测分析，广泛应用的衍生胺的标记试剂在实际应用中都存在一定的局限性，不仅试剂的稳定性差而且衍生物常有荧光碎灭现象导致检测灵敏度降低,因此开发一种新型的胺类化合物荧光标记试剂用于脂肪胺类化合物的荧光检测具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种标记反应速率快、标记产物信号高、荧光检测胺类化合物准确性和灵敏性高的新型的稳定咔唑类荧光胺类化合物标记试剂；本发明同时提供其合成方法与应用。

本发明所述的新型的稳定咔唑类荧光胺类化合物标记试剂，是以咔唑为荧光母体环，以氯甲酸酯为反应活性基团，其化学名称为：(4-(9H-咔唑-9-基)苯基)甲氧酰氯，其化学结构式为：

所述的新型的稳定咔唑类荧光胺类化合物标记试剂的合成方法，包括以下步骤：

(1)第一步取代反应：将咔唑、4-溴苄醇溶解到二甲亚砜中，加入碘化亚铜、二叔戊酰甲烷和碳酸钾，油浴130℃反应过夜，反应结束后，待反应液冷却至室温，抽滤，然后将抽滤液与(10-30)wt％NaCl水溶液混合析出固体，回收固体并干燥，用乙腈重结得到中间体(4-(9H-咔唑-9-基)苯基)甲醇；

(2)第二步氯甲酰化反应：将固体光气溶解于二氯甲烷中，冰浴冷却条件下，滴加少量吡啶作催化剂，将溶有中间体(4-(9H-咔唑-9-基)苯基)甲醇的二氯甲烷溶液逐滴加到上述溶液中，冰浴下反应4小时，缓慢升到室温反应5小时，反应结束后，抽滤，滤液用旋转蒸发仪减压旋干，并用正己烷重结晶，得到目标产物(4-(9H-咔唑-9-基)苯基)甲氧酰氯。

其中：

步骤(1)中咔唑与4-溴苄醇摩尔比为1:1.2，碘化亚铜、二叔戊酰甲烷和碳酸钾的加入量分别为咔唑质量的25％、22％和50％。

步骤(1)中反应温度为130℃，反应时间为24h。

采用乙腈将步骤(1)中所得中间体(4-(9H-咔唑-9-基)苯基)甲醇重结晶3次，得到白色针状结晶产品。

步骤(2)中(4-(9H-咔唑-9-基)苯基)甲醇与固体光气的摩尔比为1:1.1，吡啶的加入量为(4-(9H-咔唑-9-基)苯基)甲醇甲醇质量的3％。

步骤(2)中，在冰浴下，反应时间为4h；在室温下，反应时间为5h。

采用正己烷将步骤(2)中所得目标产物(4-(9H-咔唑-9-基)苯基)甲氧酰氯重结晶3次，得到白色针状结晶产品。