[发明专利]一种甜瓜疫病抗性鉴定方法

说明书

本发明属于抗病育种技术领域，具体涉及一种甜瓜疫病抗性鉴定方法，包括以下步骤：步骤1：甜瓜幼苗的培养；步骤2：接种液的制备；步骤3：接种；步骤4：病情调查及统计：甜瓜病情分级标准以病斑是否超过甜瓜幼苗上的分级节点和甜瓜幼苗的生长状态为依据来进行划分，所述分级节点包括甜瓜幼苗的茎基部、子叶和全株。甜瓜疫病抗性鉴定是甜瓜育种工作和遗传学研究的重要环节，通过人工接种鉴定，可明确抗性种质，有助于亲本的选配，提高育种效率。

技术领域

本发明属于抗病育种技术领域，具体涉及一种甜瓜疫病抗性鉴定方法。

背景技术

甜瓜(Cucumis melo L.)是葫芦科(Cucurbitaceae)的一种重要的水果型蔬菜作物。自上世纪80年代以来，我国成为世界上甜瓜种植面积和产量最大的国家。甜瓜种质资源多样，具有丰富的遗传多样性，据考证至少有3000份。

甜瓜疫病又称死秧，由疫霉菌引起的一种具有毁灭性的土传病害，该病的发病周期短，传播速度快，一旦发病就很难治愈，在我国的甜瓜产区，尤其是广东、广西、海南等南方地区发生严重，病株率可达20％～40％，严重的甚至绝收，给瓜农造成严重的经济损失，成为甜瓜种植业发展的主要障碍之一。虽然通过化学、物理、农业等防治措施可以在一定程度上减轻疫病所造成的危害，但是这些方法并不能从根本上解决问题，甚至还会对环境造成破坏，而采用抗疫病的品种是一种经济、有效、环保的防治手段。

关于瓜类疫病病原菌的研究早在1968年就已展开，主要是根据病菌的形态学特性进行分类。据现有报道，侵染瓜类的疫霉菌主要有辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)、瓜类疫霉菌(P.melonis)、掘氏疫霉菌(P.drechsleri Tucker)、烟草疫霉菌(P.nicotianaeBread)等4种，但是不同瓜类作物上疫霉菌的病原物有所不同，一种病菌又可侵染多种瓜类作物，从而导致同一作物可被多种病菌侵染。研究表明，引起甜瓜疫病的病原有辣椒疫霉菌、瓜类疫霉菌和掘氏疫霉菌。其中辣椒疫霉菌在世界各地的甜瓜产区均有报道，是用于甜瓜抗疫病研究的主要病原。

发明内容

本发明提供一种甜瓜疫病抗性鉴定方法，该方法对166份甜瓜材料进行了疫病抗性鉴定，确定了更为直观、便于观察统计的甜瓜疫病的病情分级标准。

本发明的技术方案如下：一种甜瓜疫病抗性鉴定方法，包括以下步骤：

步骤1：甜瓜幼苗的培养：

在环境温度为20～30℃、营养土含水量为80％～90％的条件下，将甜瓜种子直播于装有营养土的穴盘中。种子萌发后，营养土含水量控制在60％～80％。待甜瓜幼苗的两片子叶完全展开后间苗，待甜瓜幼苗的两片真叶展平时，人工接种辣椒疫霉菌。

步骤2：接种液的制备：

制备马铃薯葡萄糖琼脂培养基和胡萝卜琼脂培养基，将辣椒疫霉菌的菌丝先在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上进行活化培养，然后挑取菌落边缘的菌丝接种到胡萝卜琼脂培养基中进行产孢培养，接着向装有胡萝卜琼脂培养基的培养皿中加入无菌水，无菌水要没过菌丝，再将培养皿置于4℃冰箱中，30～60min后移至光照下放置，30～60min后将培养皿中的孢子悬浮液吸出，过滤去除菌丝，然后用无菌水稀释至每lmL中有10⁶个游动孢子。

步骤3：接种：

接种前将穴盘中的营养土用水浇透，然后向距离甜瓜幼苗茎基部1.0～1.5cm的营养土中注射1mL浓度为10⁶个/mL的游动孢子悬浮液，注射深度为1～2cm，一天后重复接种一次，接种后环境温度控制在30℃，营养土含水量控制在90％。

步骤4：病情调查及统计：