[发明专利]一种甜瓜疫病抗性鉴定方法

权利要求书

1.一种甜瓜疫病抗性鉴定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤1：甜瓜幼苗的培养：

在环境温度为20～30℃、营养土含水量为80%～90%的条件下，将甜瓜种子直播于装有营养土的穴盘中，种子萌发后，营养土含水量控制在60%～80%，待甜瓜幼苗的两片子叶完全展开后间苗，待甜瓜幼苗的两片真叶展平时，人工接种辣椒疫霉菌；

步骤2：接种液的制备：

制备马铃薯葡萄糖琼脂培养基和胡萝卜琼脂培养基，将辣椒疫霉菌的菌丝先在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上进行活化培养，然后挑取菌落边缘的菌丝接种到胡萝卜琼脂培养基中进行产孢培养，接着向装有胡萝卜琼脂培养基的培养皿中加入无菌水，无菌水要没过菌丝，再将培养皿置于4℃冰箱中，30～60min后移至光照下放置，30～60min后将培养皿中的孢子悬浮液吸出，过滤去除菌丝，然后用无菌水稀释至每l mL中有10⁶个游动孢子；

步骤3：接种：

接种前将穴盘中的营养土用水浇透，然后向距离甜瓜幼苗茎基部1.0～1.5cm的营养土中注射1mL 浓度为10⁶个/mL的游动孢子悬浮液，注射深度为1～2cm，一天后重复接种一次，接种后环境温度控制在30℃，营养土含水量控制在90%；

步骤4：病情调查及统计：

接种10天后对甜瓜幼苗的抗病情况进行调查，并根据病情分级标准进行分级，然后根据病情分级结果计算病情指数并划分抗性水平，所述病情分级标准以病斑是否超过甜瓜幼苗上的分级节点和甜瓜幼苗的生长状态为依据来进行划分，所述分级节点包括甜瓜幼苗的茎基部、子叶和全株。

2.根据权利要求1所述的一种甜瓜疫病抗性鉴定方法，其特征在于，所述马铃薯葡萄糖琼脂培养基的制备方法包括如下步骤：称取200g马铃薯，去皮后切成块，在去离子水中煮沸30min，然后过滤去除残渣，加入20g葡萄糖和15g 琼脂粉，最后加水定容至1L，高压蒸汽灭菌30 min。

3.根据权利要求1所述的一种甜瓜疫病抗性鉴定方法，其特征在于，所述胡萝卜琼脂培养基的制备方法包括如下步骤：称取200g胡萝卜，捣碎后，过滤去除残渣，加入16g 琼脂粉，定容至1L，高压蒸汽灭菌30min。

4.根据权利要求1所述的一种甜瓜疫病抗性鉴定方法，其特征在于，所述活化培养的培养条件为：在25℃下暗培养5天。

5.根据权利要求1所述的一种甜瓜疫病抗性鉴定方法，其特征在于，所述产孢培养的培养方法包括以下步骤：将活化培养得到的菌丝先在25℃条件下进行暗培养，待菌丝布满整个培养基后，光暗交替培养7天，所述光暗交替培养的光照培养时间为12h，黑暗培养时间为12h。

6.根据权利要求1所述的一种甜瓜疫病抗性鉴定方法，其特征在于，所述病情分级标准为：

0级：无症状；

1级：幼苗茎基部出现水渍状褐色病斑，轻微缢缩，植株不倒伏，不萎蔫；

2级：幼苗茎基部缢缩，褐色病斑未超过子叶，植株倒伏，子叶不萎蔫，真叶不萎蔫；

3级：幼苗茎部褐色病斑超过子叶，子叶萎蔫，真叶不萎蔫；

4级：幼苗茎部褐色病斑蔓延至全株，子叶干枯，真叶萎蔫，生长点不萎蔫；

5级：植株枯萎死亡。

7.根据权利要求1所述的一种甜瓜疫病抗性鉴定方法，其特征在于，所述抗性水平划分标准为：

免疫：病情指数为0；

高抗：病情指数为0< DI≤10；

抗病：病情指数为10< DI≤30；

中抗：病情指数为30< DI≤50；

感病：病情指数为50< DI≤70；

高感：病情指数为70< DI≤100。

8.权利要求1～7任一项所述方法在甜瓜育种中的应用。