[发明专利]血清中鸟嘌呤的测定方法

说明书

本发明公开了一种血清中鸟嘌呤的测定方法，属于利用可见光，通过测试反应结果颜色的变化来测试材料的方法。本发明的技术方案是：试剂II中仅有鸟嘌呤脱氨酶有效组分，指示剂及其它有效组分同在试剂I中；其测定方法为：血清先与试剂Ⅰ于37℃温浴3～5分钟，血清中游离氨与试剂Ⅰ中α‑酮戊二酸、NADH在谷氨酸脱氢酶作用下生成NAD⁺，加入试剂Ⅱ后于37℃温浴4～7分钟，鸟嘌呤在鸟嘌呤脱氨酶水解后生成氨，经反应生成NAD⁺，仪器在334nm～340nm波长处检测，以试剂Ⅰ反应产生的NAD⁺为空白，由试剂Ⅱ反应产生的NAD⁺可直接测出鸟嘌呤的含量。本发明检测时不受内源性游离氨影响，本方法是一种快捷、准确性更高的血清中鸟嘌呤检测方法。

技术领域

本发明属于一种包含酶的测定方法；或是利用可见光，通过测试反应的结果产生颜色变化来测试材料的方法，特别是涉及一种用生化分析仪快捷、准确检测血清中鸟嘌呤的测定方法。

背景技术

鸟嘌呤是一种有机碱，广泛存在于动、植物界,化学名称为2-氨基-6-氧嘌呤，无色正方形晶体或结晶性粉末，在含有过量氨存在的水溶液中，慢慢蒸去水得小菱形晶体，熔点360℃(分解并部分升华),溶于氨水、苛性碱及稀矿酸液，微溶于乙醇、乙醚，对紫外线有强烈的吸收性，为鸟苷和鸟苷酸的组成成分。其盐酸盐为单水合粉末状晶体，在100℃时失水，200℃时失去氯化氢，溶于酸化的水。鸟嘌呤可由鱼鳞经盐酸水解而得。为组成核酸的重要碱基，是DNA和RNA 中4种主要碱基之一，也是各种鸟苷酸的组成分。其N9与核糖或脱氧核糖C1 以β-糖苷键连接而成鸟苷或脱氧鸟苷。

临床实验室采用生化分析仪测定血清中鸟嘌呤，其方法是试剂I中含有NH₃、α-酮戊二酸、NADH，试剂II中仅有鸟嘌呤脱氨酶酶有效组分，指示剂及其它有效组分同在试剂I中；血清中游离氨与试剂Ⅰ中α-酮戊二酸、NADH在谷氨酸脱氢酶作用下生成NAD⁺，加入试剂Ⅱ后于37℃温浴4～7分钟，鸟嘌呤在鸟嘌呤脱氨酶作用下水解后生成氨，经反应生成NAD⁺，仪器在334nm～340nm波长处检测，以试剂Ⅰ反应产生的NAD⁺为空白，由试剂Ⅱ反应产生的NAD⁺可直接计算(测)出鸟嘌呤的含量。本发明检测时不受内源性游离氨影响，本方法是一种快捷、准确性更高的血清中鸟嘌呤检测方法。

发明内容：

为了能简单、方便、快捷及准确地测定血清中鸟嘌呤，本发明提供一种经济方便易行，准确性高、能够不受内源性氨影响的血清中鸟嘌呤的测定方法。

本发明采用的技术方案是：试剂Ⅰ中含有谷氨酸脱氢酶，α-酮戊二酸， NADH及适量防腐剂；试剂Ⅱ内含有鸟嘌呤水解酶及适量防腐剂，其测定方法为：待测血清样品先与试剂Ⅰ于37℃温浴3～5分钟，血清中游离氨与试剂Ⅰ反应生成NAD⁺，加入试剂Ⅱ后于37℃温浴4～7分钟，鸟嘌呤在鸟嘌呤脱氨酶水解后产生氨，经反应也生成NAD⁺；仪器在334nm～340nm波长处检测，以试剂Ⅰ反应产生的NAD⁺为空白，从试剂Ⅱ反应产生的NAD⁺计算出鸟嘌呤的含量，计算公式为：

OD_鸟嘌呤＝OD₂-OD₁×[SV+R₁V₁)/(SV+R₁V₁+R₂V₂)]

鸟嘌呤浓度＝F×OD_鸟嘌呤