[发明专利]检测莴苣花叶病毒的成套试剂在审
| 申请号: | 201810430265.3 | 申请日: | 2018-05-08 |
| 公开(公告)号: | CN108624715A | 公开(公告)日: | 2018-10-09 |
| 发明(设计)人: | 张永江;向均 | 申请(专利权)人: | 中国检验检疫科学研究院 |
| 主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 关畅;魏少伟 |
| 地址: | 100176 北京市大*** | 国省代码: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 成套试剂 花叶病毒 莴苣 检测 产品检验 目标序列 单链DNA 假阴性 扩增 筛查 引物 灵敏 检疫 | ||
1.检测或辅助检测莴苣花叶病毒的成套试剂,由名称为P1的引物对和名称为A1的DNA组成;
所述P1由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成;
所述A1为含有所述P1的识别序列的DNA。
2.根据权利要求1所述的成套试剂,其特征在于:所述A1为a1)或a2):
a1)含有序列表中序列3所示DNA片段的DNA;
a2)序列表中序列3所示的DNA片段。
3.检测或辅助检测莴苣花叶病毒的引物对,为权利要求1中所述P1。
4.检测或辅助检测莴苣花叶病毒的系统,包括权利要求1所述的成套试剂或权利要求3所述引物对。
5.根据权利要求4所述的系统,其特征在于:所述系统还包括进行重组酶聚合酶扩增所需的其他试剂和/或仪器。
6.检测莴苣花叶病毒的方法,包括X1)或X2):
X1)利用权利要求1所述成套试剂对待测样本的基因组RNA进行重组酶聚合酶扩增,得到扩增产物;若所述扩增产物含有272bp的DNA片段和所述A1的DNA片段,则所述待测样本含有或候选含有莴苣花叶病毒或所述待测样本为或候选为莴苣花叶病毒;若所述扩增产物含有所述A1的DNA片段,不含有272bp的DNA片段,则所述待测样本不含或候选不含莴苣花叶病毒或所述待测样本不为或候选不为莴苣花叶病毒;若所述扩增产物不含所述A1的DNA片段和272bp的DNA片段或含有272bp的DNA片段不含有所述A1的DNA片段,则扩增反应无效,需重新检测;
X2)利用权利要求2所述成套试剂对待测样本的基因组RNA进行重组酶聚合酶扩增,得到扩增产物;若所述扩增产物含有272bp和428bp的DNA片段,则所述待测样本含有或候选含有莴苣花叶病毒或所述待测样本为或候选为莴苣花叶病毒;若所述扩增产物含有428bp的DNA片段,不含有272bp的DNA片段,则所述待测样本不含或候选不含莴苣花叶病毒或所述待测样本不为或候选不为莴苣花叶病毒;若所述扩增产物不含428bp和272bp的DNA片段或含有272bp的DNA片段不含有428bp的DNA片段,则扩增反应无效,需重新检测。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于:所述重组酶聚合酶扩增的温度为40℃,和/或,所述重组酶聚合酶扩增的时间为40分钟。
8.根据权利要求6或7所述的方法,其特征在于:所述重组酶聚合酶扩增的反应体系中,所述P1的两条单链DNA的浓度均为0.4μmol/L,所述A1的浓度为0.4ng/μL。
9.权利要求1所述成套试剂或权利要求2所述引物对的下述任一应用:
X1)在检测或辅助检测莴苣花叶病毒中的应用;
X2)在制备检测或辅助检测莴苣花叶病毒中的应用。
10.权利要求3-5中任一所述系统在检测或辅助检测莴苣花叶病毒中的应用。
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