[发明专利]一种南美白对虾病毒DNA提取方法

说明书

本发明公开了一种南美白对虾病毒DNA提取方法，包括以下步骤：A、样品前处理；B、DNA提取；C、DNA沉淀；D、DNA纯化；E、DNA溶解与保存，本发明采用的提取方法方便快捷，成本低，提取精度高，对研究南美白对虾疾病的发病机理和预防具有重要意义。

技术领域

本发明涉及DNA提取技术领域，具体为一种南美白对虾病毒DNA提取方法。

背景技术

南美白对虾，学名东方南美白对虾，又称中国南美白对虾、斑节虾。节肢动物门，软甲纲，十足目，南美白对虾科，南美白对虾属。南美白对虾属个体大，通称大虾。

南美白对虾的雌性成长个体体长一般16-22厘米，重约50-80克，最大的可达30厘米，重250克;雄性较小，体长13-18厘米，重30-50克。南美白对虾为广温广盐性海产动物。牤牛岛南美白对虾体呈长筒形，左右侧扁，身体分为头、胸和腹部，由20个体节组成。腹部较长，肌肉发达，分节明显；南美白对虾可分定居型(如日本南美白对虾、宽沟南美白对虾、欧洲南美白对虾、渤海南美白对虾等)和洄游型(如中国南美白对虾、墨吉南美白对虾、长毛南美白对虾)，前一类栖于沿岸浅海，白昼常潜入沙底内，不作大范围的移动;后一类栖于河口沿岸混浊海域，常作大范围的移动和洄游。南美白对虾主要以底栖无脊椎动物为食，如多毛类、小型甲壳类和双壳类软体动物等，有时也捕浮游动物。

DNA病毒是生物病毒的一种，属于一级病毒。DNA病毒广泛存在于人、脊椎动物、昆虫体内以及多种传代细胞系中，每种病毒只能感染一种动物(个别例外)，仅少数致病。

DNA病毒的繁殖方式是复制，繁殖过程是吸附(病毒粒子借衣壳上的受体与宿主细胞粘附在一起，否则，病毒粒子将不能侵入宿主细胞。

目前，南美白对虾中病毒DNA提取步骤复杂，操作繁琐，成本高，而且提取精度低，因此有必要进行改进。

发明内容

本发明的目的在于提供一种南美白对虾病毒DNA提取方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种南美白对虾病毒DNA提取方法,包括以下步骤：

A、样品前处理；

B、DNA提取；

C、DNA沉淀：取200μl上清液移至一新灭菌EP管中，加入100微升 10mol/l乙酸铵，混匀后，加入600μl预冷无水乙醇混匀，-20℃放置20min。12000rpm，4℃离心15min，弃上清液；

D、DNA纯化：用75%乙醇洗涤沉淀2次，每次12000rpm离心1min，小心弃去上清液，最后沉淀于室温晾干10min；

E、DNA溶解与保存：沉淀晾干后加入100微升TE缓冲液溶解DNA用于PCR扩增或者保存于-20℃备用。

优选的，所述步骤A中样品前处理步骤如下：

a、将50mg-100mg的样品装入EP管中，用一次性研磨棒研碎后加入1ml 75%酒精，12000rpm，4℃离心5min，弃去上清液；

b、重复步骤a一次；

c、在EP管中加入1ml TE缓冲液，振荡混匀后，12000rpm，4℃离心5min，弃去上清液；

d、重复步骤c一次。

优选的，所述步骤B包括以下步骤：

A、细胞裂解：

a、处理后的样品中加入抽提缓冲液500μl，85℃温浴10min;

b、加入2.5微升 20mg/ml 蛋白酶K，至终浓度100微克/ml，混匀后55℃水浴1h，不时旋动;