[发明专利]一种南美白对虾病毒DNA提取方法

权利要求书

1.一种南美白对虾病毒DNA提取方法,其特征在于：包括以下步骤：

A、样品前处理；

B、DNA提取；

C、DNA沉淀：取200μl上清液移至一新灭菌EP管中，加入100微升 10mol/l乙酸铵，混匀后，加入600μl预冷无水乙醇混匀，-20℃放置20min，12000rpm，4℃离心15min，弃上清液；

D、DNA纯化：用75%乙醇洗涤沉淀2次，每次12000rpm离心1min，小心弃去上清液，最后沉淀于室温晾干10min；

E、DNA溶解与保存：沉淀晾干后加入100微升TE缓冲液溶解DNA用于PCR扩增或者保存于-20℃备用。

2.根据权利要求1所述的一种南美白对虾病毒DNA提取方法,其特征在于：所述步骤A中样品前处理步骤如下：

a、将50mg-100mg的样品装入EP管中，用一次性研磨棒研碎后加入1ml 75%酒精，12000rpm，4℃离心5min，弃去上清液；

b、重复步骤a一次；

c、在EP管中加入1ml TE缓冲液，振荡混匀后，12000rpm，4℃离心5min，弃去上清液；

d、重复步骤c一次。

3.根据权利要求1所述的一种南美白对虾病毒DNA提取方法,其特征在于：所述步骤B包括以下步骤：

A、细胞裂解：

a、处理后的样品中加入抽提缓冲液500μl，85℃温浴10min;

b、加入2.5微升 20mg/ml 蛋白酶K，至终浓度100微克/ml，混匀后55℃水浴1h，不时旋动;

B、DNA分离：

a、将溶液冷却至室温，加入500μl酚/氯仿/异戊醇，颠倒混合2min，于1200rpm, 4℃离心5min；

b、取离心后的上层水相300μl于1新的EP管中，加入200微升TE缓冲液和500μl酚/氯仿/异戊醇混合液，混合颠倒2min，于1200rpm, 4℃离心2min；

c、取离心后的上层水相300μl，加入200微升TE缓冲液和500μl氯仿/异戊醇，颠倒混合2min，于1200rpm, 4℃离心2min。