[发明专利]一种灵芝β-葡聚糖及其制备方法和在制备免疫调节药物中的应用

说明书

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种灵芝β‑葡聚糖及其制备方法和在制备免疫调节药物中的应用。灵芝β‑葡聚糖分子量为5～500kDa，单糖组成为葡萄糖和葡萄糖醛酸，两种单糖比例为30:1～4:1，其连接方式以→3)Glc(β1→及→6)Glc(β1→为主，两种连接方式比例为1:1～3:1。本发明通过将灵芝药材经过热水提取除去水溶性多糖后，残渣再用碱溶液进行提取，提取液用盐酸中和后，浓缩，经乙醇沉淀后得粗多糖。粗多糖经过阴离子交换树脂纯化，最终得到高纯度的β‑葡聚糖，通过细胞实验证明能显著促进RAW264.7细胞吞噬中性红，可用于制备免疫调节的药物。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种灵芝β-葡聚糖及其制备方法和在制备免疫调节药物中的应用。

背景技术

灵芝多糖是灵芝中较为重要的活性成分之一，结构分析显示灵芝多糖主要以高分子量的糖聚合物为主，主要是由葡萄糖、木糖，甘露糖，半乳糖和岩藻糖等单糖形成地糖类大分子组成。不同来源及提取方式所获得地灵芝多糖，具有不同的单糖组成、分子量、分支构象和溶解性等特征，可以诱导多种免疫反应来发挥免疫调节效力。

传统的灵芝多糖提取方法主要是水提醇沉，超声波辅助提取法，微波辅助提取法，酶法提取。中国专利CN102766221A公开一种灵芝多糖的提取方法，该方法包括复合酶酶解灵芝子实体、超声波处理和灵芝多糖提取。中国专利CN104292357A公开一种灵芝多糖的提取方法，该方法包括从灵芝中提取多糖，采用酶作用条件温和，采用各种不同的酶将灵芝中的脂肪、纤维素酶解，将其中的多糖提取出来，提高灵芝的利用率。中国专利CN104558227A公开一种灵芝多糖的提取方法，包括以下步骤：前处理、粗提取、冷冻提取、醇沉、除蛋白、脱色、超滤、真空干燥。以上3个专利均不涉及水提之后残渣的研究。

灵芝是一种名贵的中药材，然而灵芝多糖提取率较低是亟待解决的问题，本发明对水提后的残渣进一步用碱液进行提取，提高灵芝的生物利用率。

发明内容

本发明的目的是提供一种灵芝β-葡聚糖及其制备方法和在制备免疫调节的药物中的应用。本发明从赤灵芝水提后的残渣中进一步用碱液分离得到一种天然的β-葡聚糖，并用阴离子交换色谱柱纯化，最终得到高纯度的β-葡聚糖，通过细胞实验证明该种β-葡聚糖能显著促进RAW264.7细胞吞噬中性红，可用于制备免疫调节的药物。

为实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案：

一种灵芝β-葡聚糖，灵芝β-葡聚糖分子量为5～500kDa，单糖组成为葡萄糖和葡萄糖醛酸，两种单糖质量比例为30:1～4:1，其连接方式以→3)Glc(β1→及→6)Glc(β1→为主，两种连接方式比例为1:1～3:1。

所述的灵芝β-葡聚糖的制备方法，以赤灵芝为原料，通过热水提取除去水溶性多糖，再用碱液进行提取，提取液用盐酸中和后，浓缩，经乙醇沉淀得到粗多糖；粗多糖经过阴离子交换树脂纯化，最终得到高纯度的葡聚糖。

所述的灵芝β-葡聚糖的制备方法，包括以下步骤：

(1)热水提取除去水溶性多糖：将赤灵芝粉碎过60目筛，加入蒸馏水，加热提取1～3次，每次1～3h，除去水溶性多糖，过滤脱水后，赤灵芝的药材残渣烘干；

(2)提取得β-葡聚糖粗品水溶液：将步骤(1)所得药材残渣，加入碱溶液提取1～3次，以4000～5000r/min离心10～30min后，合并收集上清液，加入摩尔浓度0.5～1.5M的HCl水溶液，中和至上清液pH值为中性，将上清液真空减压浓缩至原体积的1/2～1/5；

(3)乙醇沉淀得β-葡聚糖粗提物：向步骤(2)所得溶液中，加入2～5倍体积的95wt％纯度的乙醇，室温放置24～72h，以9000～11000r/min离心5～15min分离得固体沉淀，收集沉淀复溶冻干，即得β-葡聚糖粗提物；