[发明专利]一种灵芝β-葡聚糖及其制备方法和在制备免疫调节药物中的应用

权利要求书

1.一种灵芝β-葡聚糖，其特征在于，灵芝β-葡聚糖分子量为5～500kDa，单糖组成为葡萄糖和葡萄糖醛酸，两种单糖质量比例为30:1～4:1，其连接方式以→3)Glc(β1→及→6)Glc(β1→为主，两种连接方式比例为1:1～3:1。

2.一种权利要求1所述的灵芝β-葡聚糖的制备方法，其特征在于，以赤灵芝为原料，通过热水提取除去水溶性多糖，再用碱液进行提取，提取液用盐酸中和后，浓缩，经乙醇沉淀得到粗多糖；粗多糖经过阴离子交换树脂纯化，最终得到高纯度的葡聚糖。

3.根据权利要求2所述的灵芝β-葡聚糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)热水提取除去水溶性多糖：将赤灵芝粉碎过60目筛，加入蒸馏水，加热提取1～3次，每次1～3h，除去水溶性多糖，过滤脱水后，赤灵芝的药材残渣烘干；

(2)提取得β-葡聚糖粗品水溶液：将步骤(1)所得药材残渣，加入碱溶液提取1～3次，以4000～5000r/min离心10～30min后，合并收集上清液，加入摩尔浓度0.5～1.5M的HCl水溶液，中和至上清液pH值为中性，将上清液真空减压浓缩至原体积的1/2～1/5；

(3)乙醇沉淀得β-葡聚糖粗提物：向步骤(2)所得溶液中，加入2～5倍体积的95wt％纯度的乙醇，室温放置24～72h，以9000～11000r/min离心5～15min分离得固体沉淀，收集沉淀复溶冻干，即得β-葡聚糖粗提物；

(4)粗品纯化得精制灵芝β-葡聚糖：将步骤(3)所得β-葡聚糖粗提物用蒸馏水溶解，以氯化钠水溶液为流动相，经过强阴离子交换树脂分离纯化，经硫酸苯酚法检测，合并收集含有β-葡聚糖的组分，经过蒸馏水透析，减压浓缩、冻干，得到高纯度灵芝β-葡聚糖。

4.根据权利要求3所述的灵芝β-葡聚糖的制备方法，其特征在于，步骤(1)中热水提取的料液质量比1:5～1:20，提取温度为60～90℃。

5.根据权利要求3所述的灵芝β-葡聚糖的制备方法，其特征在于，步骤(2)中碱溶液为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠或氢氧化铵的水溶液中至少一种，其摩尔浓度为：0.05～2M，碱提取的料液质量比为：1:3～1:20，提取温度为：-20℃～60℃，提取时间为：0.5～4h。

6.根据权利要求3所述的灵芝β-葡聚糖的纯化方法，其特征在于，步骤(4)中氯化钠水溶液的摩尔浓度为0.1～2.5M；阴离子交换树脂为二乙基氨基乙基纤维素(DEAE-cellulose)、DEAE-葡聚糖(DEAE-Sephadex)、DEAE-琼脂糖(DEAE-Sepharose)及Q SephadexFast Flow中的至少一种。

7.一种权利要求书1至6之一所述的灵芝β-葡聚糖在制备免疫调节药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的灵芝β-葡聚糖在制备免疫调节的药物中的应用，其特征在于，灵芝β-葡聚糖通过细胞实验证明能显著促进RAW264.7细胞吞噬中性红，用于制备免疫调节的药物，且在浓度为50～200μg/ml显示出较强免疫调节活性。