[发明专利]一种多聚葡萄糖醛酸及其制备方法和在免疫调节药物中的应用

权利要求书

1.一种多聚葡萄糖醛酸，其特征在于，多聚葡萄糖醛酸分子量为5~500kDa，单糖组成以葡萄糖醛酸(GlcA)和葡萄糖(Glc)为主，葡萄糖醛酸含量在50wt%~95wt%之间，葡萄糖含量在5wt%~50wt%之间，其主链连接方式为→3)GlcA(β1→，Glc以支链形式连接在GlcA主链上；

所述的多聚葡萄糖醛酸的制备方法，以赤灵芝为原料，通过热水提取除去水溶性多糖，再用碱液进行提取，提取液用盐酸中和后，浓缩，经浓度为80wt%的乙醇沉淀得到粗多糖；粗多糖经过阴离子交换树脂柱纯化，最终得到高纯度的多聚葡萄糖醛酸，包括以下步骤：

(1)热水提取除去水溶性多糖：将赤灵芝粉碎过60目筛，加入蒸馏水，加热提取1~3次，每次1~3h，除去水溶性多糖，过滤脱水后，赤灵芝的药材残渣烘干；

(2)提取多聚葡萄糖醛酸粗品水溶液：将步骤(1)所得药材残渣，加入碱溶液提取1~3次，以4000~5000 r/min离心10~30 min后，合并收集上清液，加入摩尔浓度0.5~1.5 M的HCl水溶液，中和至上清液pH值为中性，将上清液真空减压浓缩至原体积的1/2-1/5；

(3)乙醇沉淀得多聚葡萄糖醛酸粗提物：向步骤(2)所得溶液中，加入4倍体积的95%纯度的乙醇，室温放置24~72 h，以9000~11000r/min离心5~15min分离得固体沉淀，收集沉淀复溶冻干，即得多聚葡萄糖醛酸粗提物；

(4)粗品纯化得精制多聚葡萄糖醛酸：将步骤(3)所得多聚葡萄糖醛酸粗提物用蒸馏水溶解，以氯化钠水溶液为流动相，经过强阴离子交换树脂分离纯化，经硫酸苯酚法检测，合并收集含有多聚葡萄糖醛酸的组分，经过蒸馏水透析，减压浓缩、冻干，得到高纯度多聚葡萄糖醛酸；

步骤(1)中热水提取的料液质量比1:5~1:10，提取温度为60~90℃；

步骤(2)中碱溶液为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠或氢氧化铵的水溶液中至少一种，其摩尔浓度为：0.05M，碱提取的料液质量比为：1:3~1:5，提取温度为：-20℃~60℃，提取时间为：0.5~4h；

步骤(4)中氯化钠水溶液的摩尔浓度为0.2M；阴离子交换树脂为二乙基氨基乙基纤维素(DEAE-cellulose)、DEAE-葡聚糖(DEAE-Sephadex)、DEAE-琼脂糖(DEAE-Sepharose)及QSephadex Fast Flow中的至少一种。

2.一种权利要求1所述的多聚葡萄糖醛酸在制备免疫调节药物中的应用。

3.根据权利要求2所述的多聚葡萄糖醛酸在制备免疫调节药物中的应用，其特征在于，多聚葡萄糖醛酸通过细胞实验证明能显著促进RAW264.7细胞吞噬中性红，用于制备免疫调节的药物，且免疫调节活性与其样品浓度呈正相关。