[发明专利]纳米硒负载VP1基因siRNA及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种纳米硒负载VP1基因siRNA，所述纳米硒负载VP1基因siRNA的粒径较小，可以避开免疫系统到达最小的毛细血管，延长在血流中的停留时间；且其具有较高的靶标选择性、较长的半衰期。所述siRNA干扰的基因位点为第157位核苷酸；所述的siRNA序列为：Sense 5’‑ggcaucaucaaaugcuagutt‑3’，Antisense 5’‑acuagcauuugaugaugcctt‑3’。本发明还提供了上述纳米硒负载VP1基因siRNA的制备方法和应用。

技术领域

本发明涉及纳米硒负载VP1基因siRNA，尤其是纳米硒负载VP1基因siRNA及其制备方法与应用。

背景技术

手足口病是由肠道病毒引起的常见传染病，以婴幼儿发病为主，以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为主要特征。大多数患者症状轻微，但是少数患者可并发心肌炎、肺水肿、急性弛缓性麻痹、无菌性脑膜炎、脑炎等致命性并发症，个别重症患儿病情进展迅速，易引起死亡。手足口病自2008年在中国首次大规模爆发以来，每年均有不同程度的流行，常导致各地幼儿园被迫停课停园，给社会和经济带来巨大的负面影响。肠道病毒71型(EV71)是引起手足口病的主要病原。近十年来手足口病的发病率和死亡率一直居高不下的主要因素是EV71病毒有多种基因型，流行中不断变化，某些位点的基因突变会引起病毒致病性的改变，使手足口病的防治面临着巨大的压力。目前还没有有效的药物治疗，临床主要是对症和支持治疗，因此，防治手足口病的疫苗及有效的药物是亟待解决的问题。

EV71病毒灭活疫苗在2015年取得临床批件，但是近年来EV71病毒的发病率并没有下降，主要原因有：疫苗株采用的是C4亚型EV71病毒株，临床流行株可能存在变异的特点造成疫苗的预防效果不佳；另外，疫苗免疫后第6个月中和抗体效价开始下降，保护期限有限。目前针对手足口病尚无有效药物，临床上仍以对症及支持治疗为主，因此，有效抗手足口病病原的药物研究，尤其是广谱抗手足口病病原的药物研究有重要的意义。

RNA干扰技术可以针对病毒基因组保守区域发挥作用，从而在一定程度上限制了病毒产生逃避突变株的能力。RNA干扰技术所具有的对靶基因沉默作用的特异性、高效性、稳定性以及不改变宿主基因组等特性，为RNA干扰技术在抗病毒治疗中的应用提供了可能，并决定了其用于治疗疾病时可以出现药效强、不良反应小的特性。但siRNA是亲水的带负电的大分子，限制了其被组织细胞摄取，且在生物体内极不稳定，易被RNA酶降解。而且常用的siRNA转运载体如腺病毒易引发细胞突变及免疫反应，阳离子脂质体对原代细胞、免疫细胞等转染效率低下。因此，寻找一种合适的载体，将siRNA安全、高效、稳定运载到胞内是siRNA药物走向临床应用的关键问题。纳米颗粒拥有小尺寸效应、表面效应和宏观量子隧道效应等优良特性，由于其特殊的物理化学性质，作为药物的转运载体时，可将药物包裹在内部，减少药物进入体内后发生降解、水解及氧化还原反应，增强药物的稳定性。

硒是人体必需微量元素，在生物体内主要以硒蛋白的形式发挥生物功能和参与各种生理环节。硒和硒蛋白参与病毒性疾病发生发展的作用机制也是人们当前感兴趣的研究热点。研究表明硒参与许多病毒感染的发生、毒力以及病毒性疾病的发生和发展过程；宿主细胞内的硒含量会影响许多入侵病毒的突变、复制和毒力。硒的缺失会引起一些RNA病毒基因组突变的积累，如柯萨奇病毒B3、AIDS、甲型流感病毒、非典型性肺炎冠状病毒和埃博拉病毒，导致与病毒毒力相关的基因结构发生变化。

目前纳米硒运载siRNA的抗病毒研究尚未见报道。

发明内容

本发明的目的之一是提供上述纳米硒负载VP1基因siRNA，所述纳米硒负载VP1基因siRNA的粒径较小，可以避开免疫系统到达最小的毛细血管，延长在血流中的停留时间；且其具有较高的靶标选择性、较长的半衰期。

本发明的目的之二是提供上述纳米硒负载VP1基因siRNA的制备方法。

本发明的目的之三是提供上述纳米硒负载VP1基因siRNA的应用。