[发明专利]一种直接静脉回输的CAR-T细胞冻存液及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种直接静脉回输的CAR‑T细胞冻存液，含有以下体积百分比的各成分：二甲基亚砜2.0‑10.0v/v％；转化糖溶液2.0‑20.0v/v％；右旋糖苷溶液5.0‑40.0v/v％；葡萄糖溶液1.0‑10.0v/v％；人血白蛋白溶液10.0‑40.0v/v％；生理盐水5.0‑25.0v/v％。本发明还提供了上述CAR‑T细胞冻存液的制备方法及其应用。本发明摒弃了常规冻存液中不适用于临床的成分，选用临床常用的药物经过科学的配比制成冻存液，且用科学的储存方式简化冻存液配制操作，再通过优化的冻存方法简化操作步骤、提升冻存效果，为CAR‑T免疫细胞治疗的实施提供了基本的保障。

技术领域

本发明属于生物技术应用和医药技术领域，特别是涉及一种直接静脉回输的CAR-T细胞冻存液及其制备方法和应用。

技术背景

免疫细胞治疗是继手术、化疗、放疗和靶向疗法后出现的一种新型疗法，被称为治疗癌症的“第五大疗法”。尽管免疫治疗历经了多年断断续续的发展，但是其研究正在取得越来越多令人激动的结果，因此被顶级学术期刊《科学》杂志评为2013年十大科学突破之首。

CAR-T免疫细胞治疗(Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，嵌合抗原受体T细胞免疫疗法)，是利用基因工程技术手段，特异性改造患者自身的免疫T细胞，使其能够识别肿瘤细胞，从而实现特异性杀伤的作用。

CAR-T免疫细胞治疗一般治疗流程是：(1)先从癌症患者身上分离出免疫T细胞；(2)利用基因工程技术手段对其进行特定基因改造，使T细胞表面表达一种能识别肿瘤细胞的嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor,CAR)，T细胞转变成CAR-T细胞，进而能靶向杀死肿瘤细胞；(3)体外培养，大量扩增CAR-T细胞；(4)把扩增好的 CAR-T细胞输回患者体内，特异性地杀死癌细胞。

2017年12月22日，国家食药监总局(CFDA)官网发布细胞治疗产品研究与评价技术指导原则的通告，明确CAR-T免疫细胞治疗产品按照药品进行管理。因此，在CAR-T细胞体外大量扩增培养后，在维持CAR-T细胞生物学活性不变的情况下，CAR-T免疫细胞制品的长期保存和长距离运输是必要的，而CAR-T免疫细胞的有效冻存则为其作为药物进行产业化应用提供必要的基础技术保障。

细胞冻存液是直接影响冻存后细胞存活率、生物学活性等重要质量相关因素。目前市面上的免疫细胞冻存液多以胎牛血清、高比例 DMSO、患者自体血浆、非临床应用级试剂配制而成，不能直接应用于人体输注，这些冻存液存在以下问题：(1)冻存效果差；(2)冻存液成分不明确；(3)冻存过程和后续应用程序相对繁琐；(4)成本过高；(5)临床应用存在风险；(6)不适于形成产业化。

因此有必要研究一种冻存效果更好、价格更低廉、使用更方便、应用更安全的CAR-T免疫细胞冻存液。

发明内容

为了克服现有技术中存在的冻存效果差、冻存液成分不明确、冻存过程和后续应用程序相对繁琐、成本过高、临床应用存在风险性、不适合规模化生产等缺陷，本发明提供了一种直接静脉回输的CAR-T 细胞冻存液及其应用方法。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

一种直接静脉回输的CAR-T细胞冻存液，含有以下体积百分比的各成分：二甲基亚砜2.0-10.0v/v％；转化糖溶液2.0-20.0v/v％；右旋糖苷溶液5.0-40.0v/v％；葡萄糖溶液1.0-10.0v/v％；人血白蛋白溶液10.0-40.0v/v％；生理盐水5.0-25.0v/v％。

在本发明中，优选的，所述直接静脉回输的CAR-T细胞冻存液含有以下体积百分比的各成分：二甲基亚砜5.5v/v％；转化糖溶液 5.0v/v％；右旋糖苷溶液35.0v/v％；葡萄糖溶液5.0v/v％；人血白蛋白溶液30.0v/v％；生理盐水19.5v/v％。