[发明专利]从猪小肠提取肝素钠的方法

权利要求书

1.一种从猪小肠提取肝素钠的方法，其特征在于：所述的工艺步骤如下：

(1)前处理：将猪小肠放入刮肠机中，获得猪小肠粘膜浆液待用，剩余肠衣、肠皮，肠皮单独用于提取肝素钠；

(2)肠衣泡把：将肠衣绕把形成肠衣把，接着将肠衣把放入浸泡液中第一次浸泡4-5小时，取出沥干，使用肠衣专用盐对肠衣把腌制处理，之后，将肠衣把放入浸泡液中二次浸泡6-8小时，第一次浸泡的浸泡液为饱和氯化钠溶液，二次浸泡的浸泡液为盐度15°-18°的氯化钠溶液；第一次浸泡及二次浸泡时，每1000L浸泡液均浸泡160±5把肠衣把，收集第一次浸泡的浸出液待用，收集二次浸泡后的浸出液作为下一次提取时肠衣把第一次浸泡的浸泡液；

(3)酶解：将猪小肠粘膜浆液加入酶解罐，猪小肠粘膜浆液为猪小肠粘膜：水＝1:2.5-4的重量比的混合物，向酶解罐中加入步骤(2)收集的第一次浸泡的浸出液调节酶解罐中料液的盐度至5±0.5°，控制料液的pH在8.5±0.5；接着按每1000L料液加1.2±0.4kg的酶量向酶解罐内加入2709碱性蛋白酶，控制料液温度在53±3℃，盐度4.2±0.2°，pH7.0±0.5保持3±0.5小时；最后升温至85-88℃，保持20-25min得酶解液，过滤去残渣；

(4)吸附：将酶解液输入吸附罐，降温至57±3℃，加水调节盐度至3.0±0.5°，控制pH7.0-7.5，按每1000L酶解液加3-8kg的树脂量，向吸附罐内加入罗门哈斯FPA98CL型树脂，搅拌吸附6-8小时后，收集树脂；

(5)洗涤：将收集的树脂用水洗涤至pH为中性，再将树脂放入盐度4±1°、温度55-60℃的氯化钠溶液，搅拌至少1小时进行洗涤，其中，树脂：氯化钠溶液＝1kg:1.3-1.7L；

(6)洗脱：将步骤(5)洗涤后的树脂倒入洗脱罐中进行两次洗脱，其中，第一次洗脱为：将树脂加入到盐度为21±1°、温度55-60℃的氯化钠溶液中搅拌至少3小时，树脂：氯化钠溶液＝1kg:1-1.4L；第二次洗脱为：将第一次洗脱后的树脂加入到盐度为21±1°、温度55-60℃的氯化钠溶液中搅拌至少3小时，树脂：氯化钠溶液＝1kg:0.8-1.2L；合并两次收集的洗脱液；

(7)沉淀：将步骤(6)收集到的洗脱液倒入沉淀罐中，搅拌条件下向沉淀罐中加入酒精度85±5°的酒精，酒精用量以实测沉淀罐中混合液的酒精度到45°-60°为准，静置沉淀15小时以上，收集沉淀物；

(8)干燥：步骤(7)得到的沉淀物加入酒精度85°以上的酒精进行脱水1-3小时，滤干后做烘干处理即得肝素钠产品；

步骤(2)中肠衣绕把具体为：将肠衣按1±0.2米的长度来回折叠，叠完后在中间捆扎形成肠衣把，每100±1米肠衣合成一把肠衣把；肠衣把两次浸泡过程中，均用气泵向浸泡液中充空气使浸泡液上下翻滚流动；

步骤(2)中腌制处理具体为：第一步抹盐：将肠衣专用盐均匀涂抹在肠衣表面，肠衣专用盐的用量为每1把肠衣把用盐1-1.2kg；第一步抹盐完成后腌制48小时以上，接着进行第二步复盐：将肠衣专用盐再次均匀涂抹在肠衣表面，肠衣专用盐的用量为每1把肠衣把用盐0.5-0.6kg；第二步复盐完成后腌制12-14小时；

将步骤(4)收集树脂后剩余的料液重新输送至吸附罐，控制温度在57±3℃，pH7.0-7.5，按每1000L料液加2-3kg的树脂量向吸附罐内加入罗门哈斯FPA98CL型树脂再次吸附6-8小时后，收集树脂，然后与步骤(4)收集的树脂合并后，进入下一步的洗涤步骤；

步骤(7)收集沉淀物后剩余的上清液输入另一空沉淀罐中，向另一空沉淀罐中加入饱和氯化钠溶液搅拌均匀，并调节pH为9-10，上清液与饱和氯化钠溶液的体积比为1：0.5-0.7，静置沉淀8-12小时后，收集沉淀，然后与步骤(7)得到的沉淀物合并后进入下一步的干燥步骤；

收集步骤(3)酶解液过滤获得的残渣，向酶解罐中加入盐度5±0.5°的氯化钠溶液，然后将残渣重新加入酶解罐中，残渣与盐度5±0.5°的氯化钠溶液的重量比为1:5-6，控制料液的pH在8.5±0.5，接着按每1000L料液加1.0-1.2kg的酶量向酶解罐内加入2709碱性蛋白酶，控制料液温度在55±1℃，保温6-7小时；最后升温至88-90℃，保持20-25min，再静置20-30min后得酶解液，酶解液在6000-8000转/分的转速下，离心处理20-40min后，进入下一步的吸附。