[发明专利]一种检测叶酸代谢相关基因遗传信息的方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测叶酸代谢相关基因遗传信息的方法及试剂盒，涉及MTHFR基因rs1801133位点、rs1801131位点及MTRR基因rs1801394三个位点。本发明综合运用直接PCR、巢式PCR、多重PCR、创造酶切位点法PCR及PCR‑RFLP等技术，在无需提取DNA的情况下，直接使用细胞进行2轮PCR扩增，每个位点的第2轮PCR产物均可使用廉价的限制性核酸内切酶HinfI快速酶切分型，可根据实际需要，同管一次性检测三个位点，也可同管一次性检测两个位点，更可单独检测其中任何一个位点。所有PCR产物均有酶切内对照序列作为酶切的质控，以保证结果判断的准确性。整个流程操作简便、成本低廉，准确性极有保障。

技术领域

本发明属于分子检测领域，具体涉及一种检测叶酸代谢通路MTHFR基因rs1801133位点【C677T】、rs1801131位点【A1298C】及MTRR基因rs1801394位点【A66G】基因型的方法及试剂盒。

背景技术

叶酸是合成核酸所必须的元素，是细胞生长和组织修复所必需的物质，更是胚胎发育过程中不可缺少的营养素。5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)和甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)是参与叶酸代谢的最重要的两种酶，

近年来大量研究已经证实，叶酸缺乏是导致出生缺陷如唐氏综合征、唇腭裂、神经管缺陷等的主要原因。叶酸的临床功能除了预防胎儿神经管缺陷外，还能降低孕妇妊娠高血压、自发性流产和胎儿宫内发育迟缓、早产以及新生儿低出生体重等发病率。

叶酸代谢障碍引起的高同型半胱氨酸血症是心脑血管疾病的一个独立的危险因素，直接跟心脑血管疾病、老年痴呆、帕金森综合症、糖尿病并发症、癌症以及50多种慢性疾病相关。因为高同型半胱氨酸可干扰内皮细胞的抗凝功能，导致凝血倾向增高，因此发生脑中风、冠心病以及静脉血栓的风险也增高。

与叶酸代谢遗传缺陷相关的基因位点主要有3个即MTHFR基因rs1801133位点【C677T】、rs1801131位点【A1298C】及MTRR基因rs1801394位点【A66G】。它们的背景如下：

MTHFR基因rs1801133多态位点通常称为C677T，系开放读码框第665位碱基发生C→T突变【对应于GenBank中mRNA序列NM_005957.4第894位碱基或基因组序列NG_013351.1的第14783位碱基】，导致多肽链第222位的丙氨酸变为缬氨酸【NP_005948.3：p.Ala222Val】。

MTHFR基因rs1801131多态位点通常称之为A1298C，系开放读码框第1286位碱基发生A→C的突变【对应于GenBank中mRNA序列NM_005957.4的1515位碱基或基因组序列NG_013351.1的16685位碱基】，导致多肽链第429位的谷氨酸变为丙氨酸【NP_005948.3:p.Glu429Ala】，突变型C等位基因的酶活性为野生型A等位基因的68％左右。

MTRR基因rs1801394多态位点通常称之为A66G，系开放读码框第66位碱基A→G【对应于GenBank中mRNA序列NM_002454.2的203位碱基或基因组序列NG_008856.1的6757位碱基】，引起其编码的酶蛋白第22位氨基酸由Ile变为Met【Ile22Met，I22M】。