[发明专利]一种鹰嘴豆碱性多糖的制备方法

权利要求书

1.一种鹰嘴豆碱溶性多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)取清洗干净的鹰嘴豆，粉碎过60目筛，按固液比1:6加入95％乙醇浸泡3d除脂，离心，收集残渣烘干，按料液比1:15加入蒸馏水，在温度为90℃条件下，持续搅拌4h，离心，收集沉淀，将沉淀按料液比1:5-1:20加入0.1-0.4M NaOH溶液提取2-5h，离心，收集上清液，加酸中和，离心，收集上清液并浓缩；

2)将步骤1)得到的浓缩的上清液用α-淀粉酶法除淀粉，将浓缩的上清液与Sevage试剂按5：1混合，振荡，离心，去蛋白，再装入透析袋4℃过夜透析脱盐，冻干，得鹰嘴豆粗多糖；

3)将步骤2)得到的鹰嘴豆粗多糖用蒸馏水溶解，13000r/min离心20min，上清液上DEAE-琼脂糖凝胶FF填料柱，用超纯水平衡过夜，梯度洗脱后，洗脱液为0-2M NaCl溶液，洗脱流速4ml/min，以8ml/管速度自动收集，490nm紫外检测，得到两个洗脱峰，收集洗脱峰对应的洗脱液，分别冻干；

4)将步骤3)得到的目的洗脱液分别上丙烯葡聚糖凝胶s-300填料柱，等度洗脱，洗脱液为0.15M NaCl溶液，洗脱流速为0.5ml/min，自动收集，在206nm紫外检测，得到纯化后的鹰嘴豆碱溶性多糖CAP-1和CAP-2。

2.根据权利要求1所述的鹰嘴豆碱溶性多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中将沉淀按料液比1:10；加入NaOH溶液浓度为0.3M；提取时间4h；离心条件：3500r/min、离心10min；残渣烘干的温度为60℃。

3.根据权利要求1所述的鹰嘴豆碱溶性多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤2)采用的α-淀粉酶除淀粉处理具体为：将浓缩的上清液中加入一定量的α-淀粉酶，使酶浓度达到20U/mL，37℃水浴酶解至I₂-KI检测不变蓝，然后沸水浴中保持10min，使淀粉酶变性失活。

4.根据权利要求1所述的鹰嘴豆碱溶性多糖的制备方法，其特征在于，所述Sevage试剂为氯仿和正丁醇按体积比5:1混合形成。