[发明专利]一种快速检测交链孢酚和交链孢酚单甲醚总量的试纸条

说明书

本发明公开了一种快速检测交链孢酚和交链孢酚单甲醚总量的试纸条，其是利用结构如式(I)所示的半抗原制备的快速检测交链孢毒素(AOH和AME)的免疫层析试纸条，本发明采用一步间接竞争免疫层析技术开发出可快速定性或半定量检测样品中AOH和AME两种交链孢毒素总含量的免疫层析试纸条，操作简单，经济实用，适合于现场检测，可广泛应用于农产品和食品等样品中AOH和AME两种交链孢毒素污染的检测及快速筛查。

技术领域

本发明涉及食品安全监测和免疫分析检测技术领域，具体地说，涉及一种快速检测交链孢酚和交链孢酚单甲醚总量的试纸条。

背景技术

交链孢毒素(Alternaria toxins)主要是由交链孢属产生的一系列有毒的次生代谢产物。由于交链孢菌能在低温下生长繁殖，是造成贮运过程中农产品腐败变质的重要原因。目前已发现的有70多种，其中10种对动物和植物具有毒性作用。交链孢酚(Alternariol,AOH)和交链孢酚单甲醚(Alternariol monomethyl ether,AME)属于二苯并吡喃酮类毒素，是一类具有致突变性、基因毒性和致癌性等多种毒性的小分子化合物。据报道，河南省林县小麦受交链孢污染严重，且小麦原粮中AOH和AME毒素含量较高，已证明与该地区食管癌高发密切相关。EFSA在2011年和2016年进行两次风险评估结果表明，随膳食摄入的AOH和AME毒素对公众健康存在潜在风险。我国已于2017年将小麦及面粉中交链孢毒素污染列入国家食品污染物及有害因素的监控计划。因此，建立准确、高效的快速检测交链孢毒素的方法进而提高政府监管的时效性是目前亟待解决的关键问题。

目前，国内外尚未制定AOH和AME毒素在农产品及食品中的限量标准，其主要采用传统的大型仪器检测方法，如气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质谱联和毛细管电泳等，不仅费时费力，且操作要求高，不适宜大批量的快速筛选，已不能满足社会对食品安全监管的需要。免疫分析法主要有酶联免疫分析法和胶体金免疫层析法，具有快速、灵敏、操作简单等优点，近年来获得了快速发展。酶联免疫吸附法是目前常使用的一种检测方法，它具有快速、灵敏、可定量、对样品纯度要求不高，特别适用于大批量样品的检测，但由于需要酶标仪和操作熟练的人员以及检测时间相对较长，所以不适合现场快速检测。基于胶体金标记抗体与抗原特异性结合反应的免疫层析试纸条的检测结果肉眼可见，不需要大型仪器设备，检测成本低，分析时间短，从而可实现对各种真菌毒素等微量残留物的定性、在线、快速检测。

发明内容

本发明的目的是提供交链孢毒素半抗原及其制备方法与应用。

本发明的另一目的是提供一种快速检测交链孢酚和交链孢酚单甲醚总量的试纸条(即一种快速检测交链孢毒素的免疫层析试纸条)及其应用。

为了实现本发明目的，本发明的交链孢毒素半抗原，其结构如式(I)所示：

本发明还提供交链孢毒素全抗原，由所述交链孢毒素半抗原与载体蛋白偶联后得到的，即半抗原的羧基与载体蛋白的游离氨基发生缩合反应。

其中，所述载体蛋白选自牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白等；优选牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)。

所述交链孢毒素全抗原制备的特异性抗体，包括多克隆抗体和单克隆抗体。其中，所述交链孢毒素单克隆抗体是以交链孢毒素半抗原-载体蛋白偶联物(如交链孢毒素-BSA)作为免疫原，通过免疫试验动物，结合杂交瘤细胞制备技术获得的单抗。优选地，所述单抗的效价为1:810000。

采用ELISA法测定所述单抗的效价。ELISA检测效价所用的包被原，其制备方法如下：