[发明专利]一种快速提取棉花纤维DNA的方法及其应用在审
| 申请号： | 201810401271.6 | 申请日： | 2018-04-28 |
| 公开（公告）号： | CN108546701A | 公开（公告）日： | 2018-09-18 |
| 发明（设计）人： | 马磊;田新权;徐双娇;方丹;时萌 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院棉花研究所 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 夏艳 |
| 地址： | 455000 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 棉花纤维 快速提取 常规PCR 纤维 分子标记辅助选择 应用 重要农艺性状 多次离心 棉花品种 基因 裂解液 棉纤维 扩增 裂解 打碎 溯源 沉淀 耗时 育种 棉花 成熟 研究 | ||
1.一种快速提取棉花纤维DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将棉花纤维充分剪碎后用液氮研磨；
2)加入细胞裂解液充分混合，水浴30分钟；
3)加入等体积抽提液离心后，取上清加入-20℃预冷异丙醇，缓慢颠倒离心管直至有沉淀析出，-20℃静置20分钟；
4)离心弃掉上清液；
5)加入70％乙醇水溶液，离心弃掉上清液，重复2～3次；
6)加入无水乙醇离心，弃掉废液，室温晾置；
7)加入无菌水，4℃保存。
2.根据权利要求1所述的一种快速提取棉花纤维DNA的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的细胞裂解液为：Tris 100mmol/L、EDTA 10mmol/L、CTAB 20g/L、PVP-30 20g/L、Tween2020g/L、NaCl 1mol/L、β-巯基乙醇2％(v/v)，调pH至8.0。
3.根据权利要求1所述的一种快速提取棉花纤维DNA的方法，其特征在于，步骤(2)中水浴温度保持在65℃。
4.根据权利要求1所述的一种快速提取棉花纤维DNA的方法，其特征在于，步骤(3)所述的抽提液为氯仿和异戊醇按照体积比为24:1配置得到。
5.根据权利要求1所述的一种快速提取棉花纤维DNA的方法，其特征在于，步骤(3)中预冷异丙醇的添加量为0.6倍体积。
6.根据权利要求1所述的一种快速提取棉花纤维DNA的方法，其特征在于，所述的离心条件均为：12000rpm，4℃。
7.权利要求1所述的快速提取棉花纤维DNA的方法在棉花品种分子标记中的应用。
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