[发明专利]一种粪污噬菌体DNA的提取方法、提取粪污噬菌体DNA的试剂盒及该试剂盒的应用

权利要求书

1.一种粪污噬菌体DNA的提取方法，其特征在于，该方法采用超滤浓缩法和硅胶吸附柱法相结合，即首先采用超滤浓缩器浓缩纯化噬菌体，然后再采用硅胶吸附柱法提取噬菌体DNA。

2.根据权利要求1所述的粪污噬菌体DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)超滤浓缩法浓缩纯化噬菌体：对粪污进行预处理，得到滤液，利用100-kDa超滤浓缩器对滤液进行浓缩，得到浓缩液；

(2)硅胶吸附柱法提取噬菌体DNA，具体包含以下步骤：

S1:向所述浓缩液中加入DNase I，反应后加入EDTA灭活DNase I，得到中间液一；

S2:向所述中间液一中加入蛋白酶K裂解噬菌体，反应，离心，取上清，得到噬菌体裂解液上清；

S3:向所述噬菌体裂解液上清中加入DNA结合液，混匀，加入乙醇，混匀，得到中间液二，将中间液二移入吸附柱，离心，去滤液，得到吸附柱一；

S4:向吸附柱一中加入去蛋白液，离心，去滤液，得到吸附柱二：

S5:向吸附柱二中加入漂洗液，离心，去滤液，得吸附柱；

S6:重复步骤S5；

S7:向吸附柱中加入TE洗脱液，离心，得到滤液，即所述粪污噬菌体DNA。

3.根据权利要求1或2所述的粪污噬菌体DNA的提取方法，其特征在于：所述结合液包含8mol/L盐酸胍，20mmol/L Tris-HCl，所述结合液的pH为6.5。

4.根据权利要求3所述的粪污噬菌体DNA的提取方法，其特征在于：所述去蛋白液包含4mol/L盐酸胍，20mmol/L Tris-HCl和乙醇，所述乙醇在所述去蛋白液中的体积百分数为70％，所述蛋白液的pH为6.5。

5.根据权利要求4所述的粪污噬菌体DNA的提取方法，其特征在于：所述漂洗液包含20mol/L NaCl，2mol/L Tris-HCl和乙醇，所述乙醇在所述漂洗液中的体积百分数为70％，所述漂洗液的pH为8.0。

6.根据权利要求5所述的粪污噬菌体DNA的提取方法，其特征在于：所述步骤S1中反应条件为37℃温育1h。

7.根据权利要求6所述的粪污噬菌体DNA的提取方法，其特征在于：所述S2中加入的蛋白酶K至蛋白酶K的终浓度为50μg/mL，所述S2中加入蛋白酶K后反应的条件为55℃温育1h，所述步骤S2中添加蛋白酶K时，还添加SDS至SDS的质量体积百分数为0.5％。

8.根据权利要求7所述的粪污噬菌体DNA的提取方法，其特征在于：所述粪污预处理包括以下步骤：向粪便中加入SM缓冲液，震荡，过滤，得到粪污预处理液，将粪污预处理液离心取上清，过滤，得到滤液。

9.一种利用权利要求3～8任意一项所述的粪污噬菌体DNA的提取方法提取粪污噬菌体DNA的试剂盒，其特征在于，包括硅胶吸附柱，还包括以下试剂：

(1)蛋白酶K；

(2)结合液，所述结合液包含8mol/L盐酸胍，20mmol/L Tris-HCl，所述结合液的pH为6.5；

(3)去蛋白液：所述去蛋白液包含4mol/L盐酸胍，20mmol/L Tris-HCl和乙醇，所述乙醇在所述去蛋白液中的体积百分数为70％，所述蛋白液的pH为6.5；

(4)漂洗液：所述漂洗液包含20mol/L NaCl，2mol/L Tris-HCl和乙醇，所述乙醇在所述漂洗液中的体积百分数为70％，所述漂洗液的pH为8.0；

(5)TE洗脱液。

10.一种权利要求9所述的试剂盒在提取粪污噬菌体DNA中的应用。