[发明专利]一种用于石榴干腐病菌LAMP快速检测的引物组合物及其应用

说明书

本发明公开了一种用于石榴干腐病菌LAMP快速检测的引物组合物及其应用。本发明的引物组合物，由以下引物组成：F3、B3、BIP、FIP。利用该引物组合物进行石榴干腐病菌的LAMP快速检测，特异性强、灵敏度高，因此，本发明所述的引物组合物可在检测和/或鉴定石榴干腐病菌中应用，为科学研究和生产实践提供了一种简便、快速、成本低廉的检测技术，也为石榴干腐病菌的早期预警及合理用药提供了理论基础和技术指导，对增加生态社会和经济效益都具有现实而深远的意义。

技术领域

本发明涉及农作物病害检测鉴定技术和分子生物学技术领域，具体涉及一种用于石榴干腐病菌LAMP快速检测的引物组合物及其应用。

背景技术

石榴干腐病病原菌属于半知菌亚门，鲜壳孢菌属真菌。分生孢子器球形或扁球形，分生孢子菱形，深黄色，常与黏液粘在一起。僵果上的菌丝在翌年4月中旬前后产生新的孢子器，成为此病的传播源。在我国多个省份均有发生，严重影响我国石榴生产和粮食安全。为了阻止石榴干腐病传播范围的不断扩大，对其进行快速、准确地检测鉴定尤为重要。

近年来随着分子生物学相关技术的发展，基于PCR的方法已经成功用于检测石榴干腐病菌，尽管以PCR为基础的分子鉴定方法一定程度上克服了传统形态鉴定上的缺陷，但由于检测需要PCR仪、凝胶电泳和成像系统仪等昂贵的专业仪器设备，同时需要操作人员具有一定的分子生物学专业技能，并且只能在实验室条件下完成，需要较长的时间，检测过程复杂，不能满足快速检测的需求，限制了PCR检测方法在生产中的推广应用。

环介导等温扩增技术(Loop‐mediated isothermal amplification，LAMP)是Notomi等开发的一种恒温扩增方法，该方法针对靶基因的6个位点设计出4条引物，利用一种具有链式置换活性的DNA聚合酶(Bst DNApolymerase)，在恒温条件下(60℃左右)保温30-90分钟，即可完成扩增反应。由于该反应过程中产生焦磷酸镁沉淀物，出现浑浊沉淀，因此用肉眼就判定扩增结果，也可通过向其扩增产物中添加荧光染料通过颜色变化来判断，因此不需要专业的仪器设备，在普通水浴锅中或者其他稳定热源即可完成，具有简单、快速、高效、经济等特征。凭借快速灵敏的优越性，LAMP技术已在多种花卉、植物、农作物常见病虫害的快速检测中得到了应用，极大的提高了针对植物病虫害的鉴定效率和准确率，为进一步采取适宜的防控措施控制其危害提供了便利，但目前在石榴干腐病菌的检测中尚无相关报道。

发明内容

本发明提供了一种用于石榴干腐病菌LAMP快速检测的引物组合物。

本发明还提供该引物组合物的应用。

本发明进一步提供一种石榴干腐病菌LAMP快速检测方法。

本发明采用的技术方案如下：

一种用于石榴干腐病菌LAMP快速检测的引物组合物，其特征在于，由F3、 B3、FIP和BIP四条引物组成，所述引物F3、B3、FIP和BIP的核苷酸序列分别如下所示：

F3：5’-GGTCACCGTGACTTCATCAA-3’；

B3：5’-CCTTCCACTCAGCAGTGTC-3’；

FIP：5’-CACCAGTACCGGAGGCAATGATCATGATCACTGGTACCTCGC -3’；

BIP：5’-GCTGGTATCTCCAAGGATGGCCACGATGAGCTGCTTGACAC -3’。

本发明的LAMP引物组合物在制备石榴干腐病菌检测试剂中的应用。

本发明的LAMP引物组合物在检测和/或鉴定石榴干腐病菌中的应用。

一种用于检测石榴干腐病菌的试剂，包含本发明的引物组合物。

一种石榴干腐病菌LAMP快速检测方法，包括以下步骤：