[发明专利]一种用于石榴干腐病菌LAMP快速检测的引物组合物及其应用

权利要求书

1.一种用于石榴干腐病菌LAMP快速检测的引物组合物，其特征在于，由F3、B3、FIP和BIP四条引物组成，所述引物F3、B3、FIP和BIP的核苷酸序列分别如下所示：

F3：5’-GGTCACCGTGACTTCATCAA-3’；

B3：5’-CCTTCCACTCAGCAGTGTC-3’；

FIP：5’-CACCAGTACCGGAGGCAATGATCATGATCACTGGTACCTCGC-3’；

BIP：5’-GCTGGTATCTCCAAGGATGGCCACGATGAGCTGCTTGACAC-3’。

2.权利要求1所述的LAMP引物组合物在制备石榴干腐病菌检测试剂中的应用。

3.权利要求1所述的LAMP引物组合物在检测和/或鉴定石榴干腐病菌中的应用。

4.一种用于检测石榴干腐病菌的试剂，其特征在于包含权利要求1所述的引物组合物。

5.一种石榴干腐病菌LAMP快速检测方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)提取待检样品DNA，采用CTAB法提取待检样品的DNA；

(2)以提取的DNA为模板，利用权利要求1所述的LAMP引物组合物进行LAMP扩增；

(3)LAMP扩增反应结束按照以下任意一种方式观察结果：

1)向扩增产物中加入显色剂，轻晃混匀，即可观察颜色变化，扩增产物显示为黄绿色，表明待测样品中含有石榴干腐病菌；扩增产物显示为橙红色，表明待测样品中不含有石榴干腐病菌；

2)取扩增产物在2％琼脂糖凝胶电泳中电泳，观察扩增结果，如果LAMP扩增产物的电泳图谱为梯状条带，表明含有石榴干腐病菌；如果扩增产物的电泳图谱无扩增条带，表明不含有石榴干腐病菌：

所述的显色剂为SYBR Green I。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于步骤(2)所述LAMP扩增的反应体系为20μL，由下列浓度体积的组分组成：

用无菌双蒸水补充扩增体系体积到20μL。

7.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于步骤(2)所述LAMP扩增的反应条件为：65℃保温60min。