[发明专利]一种自体美容生物材料的制备方法及自体美容生物材料

说明书

本发明提供一种自体美容生物材料的制备方法及提供一种自体美容生物材料,其特征在于包括以下步骤:皮肤组织采集；成纤维细胞分离培养；制备富含血小板的血浆混合物制剂；自体美容生物材料的制备，采用该方法制备的自体美容生物材料，其制备时间短。安全性高，活性高、疗效佳。

技术领域

本发明涉及一种生物材料及其制备方法，尤其涉及一种自体美容生物材料及其制备方法。

技术背景

对于整形外科医生来说，面部软组织充填一直是个极具挑战性的课题，而注射性软组织材料的开发则是研究的难点。自1957年Wegener首次报道使用液体硅胶注射以来，注射性软组织材料的开发经历了很长的发展过程，至今未得到很好的解决。临床上使用的软组织填充材料主要为人工合成品-生物性填充材料。主要包括液体硅胶，硅胶微粒，牛胶原，纤维蛋白、玻尿酸等，这些生物材料没有生物活性，暂时驻留体内，都存在不同程度的吸收问题及或多或少的排斥反应，因此长期的临床效果都不能达到令人满意。

目前具有生物活性的软组织材料的开发对于美容界已经有了飞跃的发展。具有生物活性的软组织填充材料是指既要参与体内正常的生理代谢，又具有分泌各种生长因子和其他功能性蛋白的功能，因此也就是具有生理活性细胞的移植。目前开展类似细胞移植的研究很多，和整形外科有关的主要是脂肪干细胞，软骨细胞及成纤维细胞。但用于制作这些生物材料所需的细胞制备周期长、纯度及生物活性低，导致制备的生物材料疗效欠佳，无法满足临床需求，因此，开发出活性高、疗效好、生物相容性好的自体美容填充材料是临床所急需的。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种从耳后皮肤组织中提取成纤维细胞并将其加工成自体美容生物材料的制作方法，以及提供了一种自体美容生物材料，该制备方法克服了现有美容生物材料制备的缺点，提高了美容生物材料的活性。

为解决上述问题，本发明提供了以下技术方案。

本发明提供了一种自体美容生物材料的制备方法,包括以下步骤:

(1)组织采集：从耳后皮肤部位采集样本，用含有抗生素的磷酸盐缓冲液清洗样本后液氮保存；

(2)成纤维细胞分离培养:取出组织，解冻后先用含抗生素的DMEM(Dulbecco'sModified Eagle Medium)培养基清洗1-2遍，再使用75％的酒精短时消毒，之后用不含钙和镁离子的磷酸盐缓冲液进行洗涤，然后将组织置于含有胶原酶和分散酶的组合物中进行过夜消化，去除组织块的表皮层；之后将组织剪碎，移至专用培养基中培养10-20天,当细胞融合度达到50％以上时，收获细胞，此时细胞为P0代细胞；

将P0代细胞传代到培养瓶中，再培养3-5天，当细胞融合度达到80％以上时，消化收获细胞，此时细胞为第一代细胞P1；

将第一代细胞传代到培养瓶中，再培养2-3天，当细胞融合度达到85％以上时，消化收获细胞，此时细胞为第二代细胞P2；

在细胞自动扩增系统中将第二代细胞继续扩增5-7天，在培养过程中每天检测细胞代谢物中的乳酸值，由乳酸计算值判断培养的细胞达到指数生长末期时，收获细胞，此时收获的细胞为第三代细胞P3，即成纤维细胞；

(3)制备富含血小板的血浆混合物制剂，用制备PRP(Platelet Rich Plasma，富含血小板血浆)混合物的实施装置制备富含血小板的血浆混合物。

(4)自体美容生物材料的制备：将(2)中制备的成纤维细胞与(3)中的PRP(Platelet Rich Plasma，富含血小板血浆)混合制备成自体美容生物材料。

进一步地,在步骤(2)中，通过成纤维细胞专用培养液及限制消化时间来去除上皮细胞及角质细胞，以纯化成纤维细胞。