[发明专利]SpyCas9的基因编辑活性抑制位点及其抑制剂在审
| 申请号： | 201810384117.2 | 申请日： | 2018-04-26 |
| 公开（公告）号： | CN108795989A | 公开（公告）日： | 2018-11-13 |
| 发明（设计）人： | 黄志伟 | 申请（专利权）人： | 哈尔滨工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N9/22 |
| 代理公司： | 北京瑞恒信达知识产权代理事务所(普通合伙) 11382 | 代理人： | 张伟 |
| 地址： | 150080 黑龙江省哈尔滨市*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 活性抑制 位点 基因 抑制剂 核酸酶活性 活性抑制剂 产品提供 制备基因 开发 | ||
1.SpyCas9的基因编辑活性抑制位点，所述活性抑制位点选自SpyCas9中的Glu1108、Ser1109、Ser1216、Lys1200、Arg1335、Arg976和Arg1333中的一个或多个。
2.权利要求1所述的基因编辑活性抑制位点在制备基因编辑相关制剂中的用途。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述基因编辑相关制剂为SpyCas9的基因编辑/核酸酶活性的活性抑制剂；
优选地，所述基因编辑相关制剂为SpyCas9剪切含PAM基序的dsDNA的活性抑制剂。
4.根据权利要求2或3所述的用途，其特征在于，所述基因编辑相关制剂结合SpyCas9的PI结构域；
优选地，所述基因编辑相关制剂通过占据SpyCas9的PI结构域中的PAM-DNA相互作用位点而抑制SpyCas9的基因编辑/核酸酶活性。
5.根据权利要求2至4中任一项所述的用途，所述基因编辑相关制剂结合SpyCas9的Glu1108、Ser1109、Ser1216、Lys1200、Arg1335、Arg976和Arg1333中的一个或多个；
优选地，所述基因编辑相关制剂通过模拟PAM而阻断SpyCas9对dsDNA底物的识别和/或结合。
6.一种能够抑制SpyCas9的基因编辑/核酸酶活性的抑制剂，所述抑制剂结合SpyCas9的PI结构域；
优选地，所述抑制剂通过占据PI结构域中的PAM-DNA相互作用位点而抑制SpyCas9的基因编辑/核酸酶活性。
7.根据权利要求6所述的抑制剂，其特征在于，所述抑制剂结合SpyCas9的Glu1108、Ser1109、Ser1216、Lys1200、Arg1335、Arg976和Arg1333中的一个或多个。
8.根据权利要求6或7所述的抑制剂，其特征在于，所述抑制剂通过模拟PAM而阻断SpyCas9对dsDNA底物的识别和/或结合。
9.一种抑制SpyCas9的基因编辑活性的方法，所述方法包括提供权利要求6至8中任一项所述的抑制剂。
10.一种SpyCas9突变体，所述SpyCas9突变体相对于野生型SpyCas9在选自第1108、1109、1216、1200、1335、976和1333中的一个或多个氨基酸位点具有突变；
优选地，所述SpyCas9突变体相对于野生型SpyCas9具有选自以下突变中的一个或多个：S1216T、S1216R、R1333Y、R1333H、R1335Y、S1109R、K1200Y。
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