[发明专利]一种烟草根黑腐病菌的分离方法在审
| 申请号： | 201810379716.5 | 申请日： | 2018-04-25 |
| 公开（公告）号： | CN108384725A | 公开（公告）日： | 2018-08-10 |
| 发明（设计）人： | 康业斌;李淑君;赵世民;康蕾;叶红朝;周俊学;董昆乐;孔德辉;王玉洁;马君红;李成军;王海涛;陈玉国;白静科;丘睿 | 申请（专利权）人： | 河南科技大学;河南省农业科学院烟草研究所;河南省烟草公司洛阳市公司 |
| 主分类号： | C12N1/14 | 分类号： | C12N1/14;C12N1/02;C12R1/645 |
| 代理公司： | 洛阳公信知识产权事务所(普通合伙) 41120 | 代理人： | 孙笑飞 |
| 地址： | 471000 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 烟草根 黑腐病菌 胡萝卜片 根际土壤 黑腐病 真菌 培养皿 采集 分生孢子梗 硫酸链霉素 无菌水冲洗 菌丝 纯化培养 典型病症 分生孢子 厚垣孢子 烟草植株 圆片表面 青霉素 生长 胡萝卜 霉层 磨碎 易被 粘附 成功率 诱导 掩盖 保存 土壤 | ||
1.一种烟草根黑腐病菌的分离方法，其特征在于：采集具有烟草根黑腐病症状的烟草植株的根际土壤，将采集的根际土壤干燥磨碎后粘附于胡萝卜片上，然后将粘附有土壤的胡萝卜片放置在培养皿中培养2—4天，之后用加有50 μL/mL青霉素和50 μL/mL硫酸链霉素的无菌水冲洗胡萝卜片，继续培养2—4天后，挑取胡萝卜片上具有烟草根黑腐病典型病症的霉层，纯化培养后保存。
2.如权利要求1所述的一种烟草根黑腐病菌的分离方法，其特征在于：所述的根际土壤为距烟草根系表面2 mm以内的土壤。
3.如权利要求1所述的一种烟草根黑腐病菌的分离方法，其特征在于：所述的胡萝卜片的厚度为4-6 mm。
4.如权利要求1或3所述的一种烟草根黑腐病菌的分离方法，其特征在于：所述的胡萝卜片为新鲜胡萝卜用浓度75%酒精进行表面消毒后，使用灭菌刀切成的圆片。
5.如权利要求1所述的一种烟草根黑腐病菌的分离方法，其特征在于：先在培养皿中铺设浸过蒸馏水的脱脂棉及滤纸，然后再将粘附有土壤的胡萝卜片放于其中培养。
6.如权利要求1或5所述的一种烟草根黑腐病菌的分离方法，其特征在于：胡萝卜片在培养皿中培养的过程中，保持其处于潮湿状态。
7.如权利要求1或5所述的一种烟草根黑腐病菌的分离方法，其特征在于：胡萝卜片在培养皿中培养的过程中，保持培养温度为25 ℃。
8.如权利要求1所述的一种烟草根黑腐病菌的分离方法，其特征在于：挑取胡萝卜片上具有烟草根黑腐病典型病症的霉层后，转接至PDA平板上，置于25 ℃恒温培养箱，黑暗条件下纯化培养3-5d后，进行纯化培养2-3次。
9.如权利要求1或8所述的一种烟草根黑腐病菌的分离方法，其特征在于：纯化培养后，挑取边缘菌落转至PDA斜面培养基上，置于25 ℃恒温培养箱培养，黑暗条件下培养5-7d后，进行菌株保存。
10.如权利要求9所述的一种烟草根黑腐病菌的分离方法，其特征在于：所述的PDA平板及PDA斜面培养基中，每100ml的PDA培养基中含马铃薯20g，葡萄糖2g，琼脂2g，pH值为7.0，余量为水。
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