[发明专利]基于囊泡检测EML4-ALK融合基因的引物和试剂盒在审
| 申请号： | 201810378360.3 | 申请日： | 2018-04-25 |
| 公开（公告）号： | CN108315429A | 公开（公告）日： | 2018-07-24 |
| 发明（设计）人： | 孔关义;李好勋;赵立波 | 申请（专利权）人： | 北京恩泽康泰生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;黄爽 |
| 地址： | 102206 北京市昌平区中关村生命科*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 引物 囊泡 探针 检测 检测灵敏度 高灵敏度 临床样本 体液标本 突变检测 无创检测 胸腔积液 用药指导 数字PCR 脑脊液 试剂盒 腹水 检出 拷贝 无创 突变 血液 | ||
1.用于检测EML4-ALK融合基因的引物，其特征在于，所述引物的序列如下：
EML4-ALK-V1F:5′-GAGCCCACACCTGGGAAAG-3′
EML4-ALK-V2F:5′-GACTGGTCCCCAGACAACAAGTA-3′
EML4-ALK-V3F:5′-GCATAAAGATGTCATCATCAACCAA-3′
EML4-ALK-R:5′-AGCTTGCTCAGCTTGTACTCAGG-3′。
2.用于qPCR或数字PCR检测EML4-ALK融合基因的引物和探针，其特征在于，所述引物为EML4-ALK-V1F、EML4-ALK-V2F、EML4-ALK-V3F和EML4-ALK-R，它们的定义同权利要求1所述；所述探针的序列如下：
EML4-ALK-Probe:5′-CCGGAAGCACCAGGAGCTGC-3′。
3.含有权利要求1所述引物、或权利要求2所述引物和探针的用于检测EML4-ALK融合基因的检测试剂或试剂盒。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于囊泡中EML4-ALK融合基因的检测，所述囊泡提取自血液、胸腔积液、腹水或脑脊液。
5.一种用于qPCR检测EML4-ALK融合基因的反应体系，其特征在于，所述反应体系按50μL计为：2×PCR Master Mix 25μL，引物EML4-ALK-V1F、EML4-ALK-V2F、EML4-ALK-V3F、EML4-ALK-R和探针EML4-ALK-Probe各0.2μM，DNA模板或反转录产物15μL，补ddH2O至50μL；
其中，所述引物和探针的定义同权利要求2所述。
6.与权利要求5所述反应体系配套的PCR反应程序，其特征在于，所述PCR反应程序为：95℃预变性10min；95℃15s，60℃30s，15个循环；95℃15s，60℃30s收集荧光，35个循环。
7.一种用于数字PCR检测EML4-ALK融合基因的反应体系，其特征在于，所述反应体系按15μL计为：Quantstudio 3D Master Mix 7.5μL，引物EML4-ALK-V1F、EML4-ALK-V2F、EML4-ALK-V3F、EML4-ALK-R和探针EML4-ALK-Probe各0.2μM，DNA模板或反转录产物3μL，补ddH2O至15μL；
其中，所述引物和探针的定义同权利要求2所述。
8.与权利要求7所述反应体系配套的PCR反应程序，其特征在于，所述PCR反应程序为：96℃预变性10min；60℃30s，98℃30s，50个循环；60℃2min。
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