[发明专利]多杀性巴氏杆菌菌影疫苗的制备及其免疫效力分析在审
| 申请号： | 201810376972.9 | 申请日： | 2018-04-24 |
| 公开（公告）号： | CN108578687A | 公开（公告）日： | 2018-09-28 |
| 发明（设计）人： | 张晓轩;翟军军;倪宏波;闻晓波;周玉龙 | 申请（专利权）人： | 黑龙江八一农垦大学 |
| 主分类号： | A61K39/102 | 分类号： | A61K39/102;A61P31/04;C12N15/70;G01N33/569;G01N33/68 |
| 代理公司： | 长沙星耀专利事务所(普通合伙) 43205 | 代理人： | 许伯严 |
| 地址： | 163319 黑龙江*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 菌影 多杀性巴氏杆菌 疫苗 制备 诱导 免疫效力 小鼠 体液免疫和细胞免疫 巴氏杆菌 菌液离心 免疫接种 灭活疫苗 收集菌体 研究动物 诱导小鼠 无菌PBS 裂解 重悬 沉淀 分析 抵抗 攻击 应用 | ||
1.一种多杀性巴氏杆菌菌影疫苗的制备方法，其特征在于：选择裂解率最高时的诱导时间和起始诱导浓度进行诱导，将诱导后的菌液离心收集菌体沉淀，然后用无菌PBS重悬菌体。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：将重悬的菌体沉淀用无菌PBS溶液稀释至浓度为1×109 CFU/mL。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：将重悬的菌体沉淀用无菌PBS稀释至浓度为2×109 CFU/mL，加入0.3 %体积的甲醛，37 ℃过夜灭活。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于：将灭活后的菌液与等体积的ISA 206佐剂充分乳化混匀。
5.一种多杀性巴氏杆菌菌影疫苗的免疫效力分析方法，其特征在于，所述方法具有如下步骤：将25 g的雌性昆明系小白鼠，间隔两周连续接种两次；在免疫前采血分离血清做阴性血清，在一免2周后，二免2周后采血分离血清利用间接ELISA方法检测小鼠血清中IgG抗体的水平，同时使用细胞因子检测试剂盒检测二免两周后各组小鼠血清中IL-4、和IFN-γ的含量；然后从二免后3周开始连续数周采集血液，每次间隔一周，检测小鼠血清中IgG抗体的消长趋势；每次免疫两周后每组处死5只小白鼠，无菌取出脾脏，从脾脏中分离淋巴细胞，检测免疫后CD4+和CD8+ T淋巴细胞的动态变化；在二免2周后用多杀性巴氏杆菌对试验小白鼠进行攻毒，攻毒后记录其的存活率。
6.如权利要求1所述的一种多杀性巴氏杆菌菌影疫苗在预防动物巴氏杆菌病方面的应用。
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