[发明专利]一种生产低温甾醇酯酶的菌株及其发酵方法

说明书

本发明涉及微生物学、生物化学及发酵工程等领域，是一种生产低温甾醇酯酶的菌株，命名为Q‑06，该菌株来自对原始菌株Pseudomonas fragi低温驯化。本发明的生产低温甾醇酯酶的菌株Q‑06生产低温甾醇酯酶最适温度为18‑24℃，无需加热/冷却等耗能即可制得低温甾醇酯酶，降低生产成本，满足工业生产需求；本发明的生产低温甾醇酯酶的菌株Q‑06具有生产甾醇酯酶的能力，该菌能高效地产生稳定的低温甾醇酯酶。

技术领域

本发明涉及微生物学、生物化学及发酵工程等领域，具体涉及对一株莓实假单胞菌进行低温驯化，并利用新的低温菌株发酵获得甾醇酯酶的方法。

背景技术

甾醇酯酶（Sterol esterase，EC 3.1.1.13）是一种酯类水解酶，它能催化甾醇酯水解生成甾醇和脂肪酸，在适宜条件下也可通过酯化或酯交换反应催化甾醇酯合成。甾醇酯酶可帮助机体消化吸收油脂类营养物质，因其与人体脂质代谢及胆固醇吸收有关，甾醇酯酶是检测血液中总胆固醇含量的重要酶制剂之一。在造纸工业中，可利用甾醇酯酶与脂肪酶结合使用的方法，有效水解木材甾醇酯，改善纸张生产过程中的“树脂障碍”问题。目前，对微生物发酵生产甾醇酯酶的研究主要集中在甾醇酯酶高产菌株的分离鉴定、诱变育种、甾醇酯酶的分离纯化以及在工程菌中克隆表达阶段，其中均为中高温甾醇酯酶。而低温甾醇酯酶在低温下具有高酶活力及高催化效率，因此，在工业化生产中具有节约能源的优势；经过温和的热处理即可使低温酶丧失活力，而低温或适温处理不会影响产品的品质。低温甾醇酯酶的应用将对传统的食品、医药等领域产生深远的影响。目前国内外还未见海洋微生物发酵生产低温甾醇酯酶的研究报道，如若海洋微生物发酵甾醇酯酶实现工业化生产则可创造良好的经济效益和社会效益。

发明内容

本发明的目的是提供一种低温莓实假单胞菌即一种生产低温甾醇酯酶的菌株，并提供了其发酵生产甾醇酯酶的方法。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：

一种生产低温甾醇酯酶的菌株，命名为Q-06，该菌株来自对原始菌株Pseudomonas fragi（CGMCC NO.1.3349）低温驯化，申请人已针对菌株Q-06发展了一套培养技术，能从该菌稳定发酵生产低温甾醇酯酶。

所述生产低温甾醇酯酶的菌株生物化学特征为：

菌落形态特征为：

在甾醇酯培养基上生长良好，菌株Q-06的单菌落近似圆形，边缘整齐，表面隆起，呈淡黄色，不透明，用接种环易于挑取，中心有光泽；

菌体形态特征为：

菌株呈杆状，多为单个排列，革兰氏染色结果呈阴性；

主要生理生化特征：

氧化酶试验、接触酶试验呈阳性，能够氧化分解葡萄糖，能够生成吲哚乙酸，不能生成硫化氢，不能水解淀粉，硝酸盐还原试验、伏普（VP）试验、甲基红（MR）试验、明胶水解试验均呈阴性，精氨酸双水解酶试验呈阳性反应；

遗传学特征：

所述的甾醇酯酶生产菌株Q-06进行序列鉴定，PCR扩增产物序列长度为1489bp。

本发明所述的一种海洋微生物发酵生产低温甾醇酯酶的方法具体包括以下步骤:

1）对菌株Pseudomonas fragi进行低温驯化得到菌株Q-06，驯化温度由高到低为：30℃→28℃→26℃→24℃→22℃→20℃→18℃，使其在低温环境中生长良好；

2）将1）低温驯化得到的菌株接种于固体种子培养基上，在18～24℃培养48-96小时；