[发明专利]一种高效的慢病毒生产体系及其生产方法有效
| 申请号： | 201810371657.7 | 申请日： | 2018-04-24 |
| 公开（公告）号： | CN108611326B | 公开（公告）日： | 2019-07-19 |
| 发明（设计）人： | 高山 | 申请（专利权）人： | 高山 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京尚诚知识产权代理有限公司 11322 | 代理人： | 顾小曼;王磊 |
| 地址： | 100032 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 慢病毒 包装质粒 生产体系 载体质粒 蛋白基因 调节基因 外源基因 质粒表达 高滴度 胞膜 生产 种质 病毒 基因 携带 | ||
1.一种高效的慢病毒生产试剂盒，其特征在于：
其为由携带外源基因的载体质粒和3个包装质粒pLP1、pLP2、pLP-VSVG构成的四质粒表达系统，包装质粒pLP1表达慢病毒的基本结构基因gag/pol，包装质粒pLP2表达慢病毒的调节基因rev，包装质粒pLP-VSVG表达慢病毒的胞膜蛋白基因VSVG，
其中，这四种质粒的比例为pLP1：pLP2：pLP-VSVG：载体质粒＝9:6:9:8。
2.如权利要求1所述的高效的慢病毒生产试剂盒，其特征在于：
所述载体质粒为用于哺乳动物表达系统的载体质粒。
3.如权利要求2所述的高效的慢病毒生产试剂盒，其特征在于：
所述载体质粒为携带GFP基因的质粒pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP。
4.使用权利要求1～3中任一项所述的高效的慢病毒生产试剂盒的慢病毒的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：
接种步骤，将转染细胞接种至细胞培养皿，细胞生长至覆盖70-80％底面积；
转染步骤，将pLP1、pLP2、pLP-VSVG和载体质粒这四种质粒共同瞬时转染至所述转染细胞的步骤，其中pLP1：pLP2：pLP-VSVG：载体质粒＝9:6:9:8；
培养步骤，培养48-72小时，收集病毒上清；和
浓缩步骤，将所述病毒上清离心去除碎片后，将病毒浓缩100倍以上，得到病毒浓缩溶液。
5.如权利要求4所述的生产方法，其特征在于：
转染时所述四种质粒的总量为13.2μg/ml。
6.如权利要求4所述的生产方法，其特征在于：
所述载体质粒为用于哺乳动物表达系统的载体质粒。
7.如权利要求6所述的生产方法，其特征在于：
所述载体质粒为携带GFP基因的质粒pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP。
8.如权利要求4所述的生产方法，其特征在于：
转染细胞为哺乳动物细胞。
9.如权利要求8所述的生产方法，其特征在于：
所述哺乳动物细胞为Lenti-X细胞系。
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