[发明专利]牦牛肉中17种氨基酸含量的测定方法

权利要求书

1.牦牛肉中17种氨基酸含量的测定方法，其特征在于，包括有以下步骤：

1)配制缓冲液：

a)分别配制pH2.2、pH3.3、pH4.0和pH6.4的柠檬酸钠Na₃C₆H₅O₇.2H₂O缓冲液；

b)配制pH5.2的乙酸锂溶液；

2)配制茚三酮溶液：

取150ml二甲基亚砜C₂H₆OS和乙酸锂溶液50ml加入4g水合茚三酮C₉H₄O₃.H₂O和0.12g还原茚三酮C₁₈H₁₀O₆.2H₂O搅拌至完全溶解即可；

3)配制冷冻剂：

将市售食盐与冰按质量比1:3的比例混合即可；

4)配制水解液：

取优级纯的浓盐酸与水按照体积比1:1混合均匀，即得到所需的6mol/L的水解液；

5)制备混合标准贮备液：

准确吸取17种氨基酸的混标液0.2ml，加入1.3ml的样品贮备液，制备得到混合标准贮备液；

6)牦牛肉样品前处理：

采集海北牦牛肉、大通牦牛肉样品各20份，将样品粉碎后置于硫酸纸上精密称取0.2000g，放入水解管中，用移液管加入6mol/L的步骤4)配制的水解液10ml，置于步骤3)配制的冷冻剂中10min，用真空泵抽真空并封口后置于110℃烘箱中水解22小时；取出水解好的样品，将其置于室温下至冷却至室温；将水解管中的液体移出，用蒸流水反复冲洗水解管，将所有的液体移出后，定容在100ml容量瓶中，再用滤纸过滤定容好的液体，吸取10ml过滤液用旋转蒸发仪蒸干，加入10ml样品稀释液，经0.45μmol的滤膜过滤，即得到前处理后的牦牛肉样品；

7)氨基酸含量分离检测：

色谱柱规格为LCAK06/Na4.6×200mm，柱温为74/58℃，流动相为：步骤1)步骤a)中配制的pH3.3、pH4.0和pH6.4的柠檬酸钠Na₃C₆H₅O₇.2H₂O缓冲液，步骤1)步骤b)中配制的pH5.2的乙酸锂溶液和步骤2)中配制的茚三酮溶液，流动相流率为0.45ml/min，准确吸取0.200ml17种氨基酸混合标准品，置入1.5ml进样瓶中，加入1.3ml样品稀释液，此上机测定用的氨基酸标准稀释液浓度为0.333mmol/ml，用全自动氨基酸分析仪以外标法测定试样测定牦牛肉样品中的17种氨基酸含量；同时还需进行精密度试验和稳定性试验。

2.根据权利要求1所述的牦牛肉中17种氨基酸含量的测定方法，其特征在于，所述步骤1)步骤a)中pH2.2的柠檬酸钠Na₃C₆H₅O₇.2H₂O缓冲液的配制方法为：称取19.6g柠檬酸钠和16.5ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或500g/L的氢氧化钠溶液调节pH至2.2；所述样品稀释液、样品加载液和样品贮备液均为pH2.2的柠檬酸钠Na₃C₆H₅O₇.2H₂O缓冲液。

3.根据权利要求1所述的牦牛肉中17种氨基酸含量的测定方法，其特征在于，所述步骤1)步骤a)中pH3.3的柠檬酸钠Na₃C₆H₅O₇.2H₂O缓冲液的配制方法为：称取19.6g柠檬酸钠和12ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或500g/L的氢氧化钠溶液调节pH至3.3。