[发明专利]SEB类毒素疫苗气溶胶肺递送免疫小鼠模型的制备方法

说明书

本发明公开了一种SEB类毒素疫苗气溶胶肺递送免疫小鼠模型的制备方法。本发明所提供的制备葡萄球菌肠毒素B疫苗液体气溶胶肺递送免疫动物模型的方法，包括如下步骤：(1)通过液体气溶胶的方式将葡萄球菌肠毒素B疫苗递送至动物的肺部；(2)再通过液体气溶胶的方式将葡萄球菌肠毒素B递送至步骤(1)处理过的所述动物的肺部；(3)再对步骤(2)处理过的所述动物进行脂多糖致敏，得到动物模型。本发明成功制备了葡萄球菌肠毒素B类毒素疫苗液体气溶胶肺递送免疫小鼠模型。证实，SEB类毒素疫苗经肺递送吸入感染免疫后具有较好的免疫效果，能保护10倍LD50剂量SEB的感染。本发明对于筛选葡萄球菌肠毒素B疫苗具有重要意义。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种SEB类毒素疫苗气溶胶肺递送免疫小鼠模型的制备方法。

背景技术

生物威胁及其防御是目前世界各国最重要的国家安全关切问题之一，也是军事医学研究的重要领域之一。生物威胁主要包括生物战争和生物恐怖活动，是指利用生物剂(包括战剂)故意对特定目标人群以及与人类生产生活密切相关的其他生物体(如动物、植物)和设施等发动袭击的行为。因此，生物威胁不仅可以大量杀伤人、畜，而且造成的民众心理恐慌、社会混乱以及经济损失等都是十分巨大的。构成生物威胁的主要元素是生物剂，而生物剂中最主要的是烈性病原体及其毒性产物(毒素)。

金黄色葡萄球菌肠毒素B(Staphylococcal enterotoxin B,SEB)是金黄色葡萄球菌产生的一种外毒素，是重要的细菌超抗原，能在很低浓度条件下激活大量T细胞，并刺激释放细胞因子，能引起人和动物呕吐、腹泻、腹痛等中毒症状，甚至造成机体不可逆的病变导致死亡。1.7μg的SEB就可杀死一个成年人，是被列入联合国《禁止生物武器公约》核查清单的11种生物毒素之一。

SEB感染一个重要的临床症状是毒性休克综合征(TSS)，这与SEB的超抗原特性有关，是SEB刺激免疫细胞分泌过量的细胞因子的结果。目前对SEB中毒的治疗仅限于支持疗法，尚缺乏更有效的手段。而SEB疫苗的思路是对SEB蛋白进行基因突变或修饰，使之失去或降低超抗原的毒性作用，但能刺激机体产生具有保护作用的特异抗体，用于防治SEB的毒性效应。SEB疫苗常规接种途径为皮下注射，目前无其他接种途径的研究报道。

目前，针对液体气溶胶或干粉气溶胶等的研究多采用口鼻暴露和全身暴露，这两种方法虽然对实验动物无创伤，但是无法精确定量给药剂量，样品在暴露塔中损耗较大且容易发生沉降。而且相关的仪器设备体积大、价格不菲。

发明内容

本发明的目的是提供一种制备葡萄球菌肠毒素B疫苗液体气溶胶肺递送免疫动物模型的方法。

本发明所提供的制备葡萄球菌肠毒素B疫苗液体气溶胶肺递送免疫动物模型的方法，具体可包括如下步骤：(1)通过液体气溶胶的方式将葡萄球菌肠毒素B疫苗递送至动物的肺部；(2)再通过液体气溶胶的方式将葡萄球菌肠毒素B递送至步骤(1)处理过的所述动物的肺部；(3)再对步骤(2)处理过的所述动物进行脂多糖(LPS)致敏，得到动物模型。

进一步地，所述动物可为小鼠，如BALB/c小鼠，具体如BALB/c雌性小鼠。

进一步地，所述葡萄球菌肠毒素B疫苗中的活性成分为葡萄球菌肠毒素B类毒素。

其中，所述葡萄球菌肠毒素B类毒素为经甲醛灭活的葡萄球菌肠毒素B。具体的，所述葡萄球菌肠毒素B类毒素是将甲醛和葡萄球菌肠毒素B按照4300:1～21500:1(如4300:1)的摩尔比于37℃反应30天后制得的。

更进一步地，所述葡萄球菌肠毒素B疫苗由所述葡萄球菌肠毒素B类毒素和CpG佐剂按照质量比1:1混合而成。

进一步地，所述葡萄球菌肠毒素B疫苗的递送次数为3次，每2周递送一次，每次的递送量为以所述葡萄球菌肠毒素B类毒素的量计10μg/体重为0.02kg。如每只小鼠10μg(小鼠体重0.02kg)。