[发明专利]蛋壳膜酶解制备抗氧化多肽的方法

说明书

本发明公开了一种蛋壳膜酶解制备抗氧化多肽的方法，该方法首先将禽蛋壳膜粉加入水中混合均匀，得到膜粉水溶液；再向膜粉水溶液中加入还原剂，混合均匀，得到混合物；然后向混合物中加入蛋白酶，酶解得到酶解液；最后将酶解液置温度为80～95℃的热水中处理10～30min后迅速冷却，在转速为8000～10000r/min条件下离心5～20min，收集上清液，透析袋透析，且干燥处理得到抗氧化多肽。本发明立足于寻找天然高效的抗氧化剂，充分利用废弃的禽蛋壳膜，通过亚硫酸钠打开蛋壳膜中顽固的二硫键，微波辅助缩短酶解时间，使用的亚硫酸钠毒性低并且易于除掉，通过碱性蛋白酶的切割条件控制，使抗氧化活性得以高效实现。

技术领域

本发明涉及禽蛋加工利用技术领域，具体地指一种蛋壳膜酶解制备抗氧化多肽的方法。

背景技术

氧化对需氧生物特别是脊椎动物和人类都是一个重要的代谢过程，但同时会导致自由基的形成。自由基是高度不稳定的、易于和其他分子发生化学反应的原子、分子及带有不成对电子的离子，活性氧自由基能引起氧化应激。氧化应激涉及多种人类疾病，如癌症、动脉粥样硬化、糖尿病、神经系统疾病等。食品中，氧自由基会攻击脂质或者蛋白质导致食品产生不愉快气味，颜色发暗或质地不良。应用抗氧化剂能使人体免受氧化应激的破坏，并防止食品成分氧化变质，虽然许多人工合成的抗氧化剂能成功的清除氧自由基，但是由于它们的毒副作用使得它们的使用往往受到限制。因此，有必要开发天然的无副作用的抗氧化剂。

蛋白质水解为肽后，充分暴露了其具有抗氧化作用的基团，能更好地发挥其抗氧化作用，因此，蛋白质酶解液的抗氧化活性通常比同源的蛋白及氨基酸的抗氧化活性更强。并且，多肽在人体内的消化吸收由于同源蛋白质或游离氨基酸。生物活性肽是来自蛋白质水解产物的具有2-20个氨基酸序列的短肽，其对人体健康有很多积极作用，如抗氧化活性，抗菌活性，血管紧张素-I转化酶抑制作用，免疫调节作用等，在化妆品，食品添加剂，营养品，药品等领域都得到广泛应用。研究发现，很多不同来源的多肽都具有抗氧化能力，如水解大豆蛋白、鹰嘴豆蛋白、花生蛋白、白果蛋白、大米蛋白、猪骨蛋白、猪血血红蛋白和鸡蛋蛋白等得到的多肽都具有一定的抗氧化性。

我国鸡蛋消费量巨大，2014年全国禽蛋产量2894.0万吨，禽蛋产量保持逐年增长趋势。在禽蛋生产和消费过程中，禽蛋壳膜大量产生，并且禽蛋壳膜主要作为废弃物处理，造成了资源浪费和环境污染。蛋壳膜含有约90％的蛋白质，包括角蛋白、胶原蛋白、唾液酸蛋白、卵清蛋白、溶菌酶、卵转铁蛋白等。蛋壳膜是一种理想的制备抗氧化多肽的原料。

蛋壳膜主要由角蛋白构成，角蛋白是硬蛋白，含有高含量的二硫键，这使得蛋壳膜分子结构紧密，不溶于水和多种溶剂，极大地限制了蛋壳膜的开发利用。当前水解蛋壳膜使用较多的方法是先采用3- 巯基丙酸打开蛋壳膜的二硫键，再进行酶解。3-巯基丙酸具有毒性，因此采用无毒或低毒的还原剂来替代3-巯基丙酸是目前蛋壳膜酶解需要解决的关键技术问题。利用现代生物技术对蛋壳膜资源进行深加工，合理的选择酶类等，通过工艺优化生物活性肽的抗氧化能力将提高蛋壳膜的利用价值。