[发明专利]Cap-TFlg蛋白在制备PCV2疫苗中的应用

说明书

本发明的目的是公开Cap‑TFlg蛋白在制备PCV2疫苗中的应用。TFlg通过与PCV2Cap蛋白C端融合展示于PCV2 VLPs表面，并通过激活TLR5通路来提高PCV2 VLPs疫苗的免疫效果。本发明利用生物信息学手段，通过自主设计，对猪圆环病毒2型的ORF2和flagellin(TFlg)基因进行原核密码子优化，并人工合成适合在大肠杆菌高效表达的Cap和Cap‑TFlg蛋白表达基因。用本发明的Cap和Cap‑TFlg VLPs与适当的佐剂混合分别免疫仔猪，Cap‑TFlg VLPs能显著增强小猪的免疫应答，具有更好的免疫原性和保护性。

技术领域：

本发明属于兽用生物制药领域，具体涉及Cap-TFlg蛋白在制备PCV2疫苗中的应用。

背景技术

猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2，PCV2）是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（Postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS）的主要病原，此外还与猪皮炎与肾病综合征、仔猪先天性震颤、流产和渗出性皮炎等有关，这些疾病统称为猪圆环病毒病。该病广泛流行于世界各地，在我国猪群中流行较为严重，临床上常与猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟和猪细小病毒等混合感染，继发感染，给养猪业造成了巨大的损失。目前，疫苗接种是防控PCV2的有效手段，国内外研发的商品化PCV2疫苗已陆续获得上市认可，主要包括全病毒灭活疫苗、重组病毒嵌合灭活疫苗和重组亚单位疫苗，这些疫苗的应用为PCV2感染的控制发挥了重要的作用，但免疫效果仍有待进一步提高

亚单位疫苗研究较多的是基因工程疫苗亚单位疫苗，是指含有病原体的一种或几种抗原，而不含有病原体的其他遗传信息。因此，亚单位疫苗不含有感染性组分，无须灭活，也无致病性。国内外许多学者将PCV2 Cap蛋白单独表达以研制能有效防治PCV2感染的亚单位疫苗。常用的是病毒的杆状表达系统在昆虫细胞中表达的Cap蛋白，应用该系统获得的Cap蛋白能自我组装成类病毒粒子，将其免疫动物后可诱导高水平的ELISA抗体以及PCV2特异性的淋巴细胞增殖反应。如Boehringer-Ingelhein动物保健公司研制的PCV2疫苗（CircoFLEX）和Intervet动物保健公司研制的PCV2疫苗（Circumvent），均是运用昆虫杆状病毒表达PCV2的ORF2基因，大量获得具有免疫原性的PCV2 Cap蛋白，加入佐剂制备成疫苗。大量田间试验表明该类疫苗可为仔猪提供良好的免疫保护，能减轻病毒血症，减少淋巴结组织损伤及PCV2病毒载量，对欧洲及北美的PCV2的控制发挥了巨大作用。目前我国也已有PCV2 亚单位疫苗注册上市（青岛易帮易圆净），适当降低了 PCV2 疫苗的防治费用，促进了生猪养殖业的发展。

研究表明在PCV2 Cap蛋白的N端或C端展示T细胞或B细胞表位，能提高特异性的免疫应答。鞭毛素（Flagellin）是细菌鞭毛丝状体的主要结构蛋白。作为一类独特的细菌病原相关模式，flagellin具有激活 Toll-like receptor 5(TLR5) 和 NLP family CARDdomain containing 4 (NLRC4) 两条信号通路的免疫活性。大量研究表明，flagellin能以TLR5和NLRC4通路依赖的方式有效激活免疫应答，可以作为免疫佐剂有效增强疫苗抗原特异性的免疫应答；最近的研究表明 Flagellin 的第85至111位短肽能作为佐剂增强抗原特异性的免疫应答。

发明内容：

本发明的目的是公开Cap-TFlg蛋白在制备PCV2疫苗中的应用。TFlg通过与PCV2Cap蛋白C端融合展示于 PCV2 VLPs表面，并通过激活TLR5通路来提高PCV2 VLPs疫苗的免疫效果。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

Cap-TFlg蛋白在制备PCV2疫苗中的应用，所述疫苗能够使怀孕母猪所产仔猪获得较好的被动免疫，能够有效抵抗强毒株的攻击，提高仔猪的存活率。

一种PCV2VLPs疫苗，其特征在于，所述疫苗包含Cap-TFlg蛋白和佐剂。