[发明专利]一种线性扩增双链DNA的方法及应用有效
| 申请号： | 201810361588.1 | 申请日： | 2018-04-20 |
| 公开（公告）号： | CN110387399B | 公开（公告）日： | 2023-04-18 |
| 发明（设计）人： | 王力刚 | 申请（专利权）人： | 北京全谱医学检验实验室有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 北京卓孚律师事务所 11821 | 代理人： | 谢梦欣 |
| 地址： | 100000 北京市大兴区北京经*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 线性 扩增 dna 方法 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种线性扩增双链DNA的方法，所述方法包括：
(a)对双链DNA进行末端修复及加A，
(b)将经历末端修复及加A的双链DNA的一端通过连接酶反应加上为双链的接头，
(c)使用RNA聚合酶扩增产生大量RNA，
(d)使用SEQ ID NO. 5所示的逆转录引物逆转录成DNA，
(e)使用SEQ ID NO. 6所示的二链合成引物扩增DNA，
其中，所述双链DNA为分离的游离DNA且长度在150bp至300bp之间，
所述为双链的接头由SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列与SEQ ID NO.2所示序列的核苷酸序列退火形成，和由SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列与SEQ ID NO.4所示序列的核苷酸序列退火形成。
2.根据权利要求1所述的方法，双链DNA为具有平末端或粘性末端的DNA片段。
3.根据权利要求1所述的方法，RNA聚合酶选自：T7 RNA聚合酶、T3 RNA聚合酶。
4.根据权利要求1所述的方法，RNA聚合酶扩增为，RNA聚合酶以带有启动子片段的DNA序列为模板，重复合成RNA的过程。
5.根据权利要求1所述的方法，逆转录为使用逆转录酶以RNA为模板，使用特异性通用引物合成DNA的过程。
6.根据权利要求5所述的方法，逆转录酶选自：MMLV、AMV。
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