[发明专利]一种獭兔皮肤真皮毛乳头细胞分离培养方法在审
| 申请号： | 201810355965.0 | 申请日： | 2018-04-19 |
| 公开（公告）号： | CN108359633A | 公开（公告）日： | 2018-08-03 |
| 发明（设计）人： | 李福昌;刘公言;吴振宇;李凡;刘磊 | 申请（专利权）人： | 山东农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 济南千慧专利事务所(普通合伙企业) 37232 | 代理人： | 商福全 |
| 地址： | 271018 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 分离培养 獭兔 皮肤 消化 乳头细胞 真皮毛 去除 细胞生物学技术 细胞培养基 背部皮肤 表皮处理 分离过程 机械损伤 皮肤真皮 胎牛血清 乳头 分离酶 胶原酶 培养箱 上清液 无细胞 表皮 剪碎 重悬 显微镜 成功率 游离 细胞 观察 | ||
1.一种獭兔皮肤真皮毛乳头细胞分离培养方法，其特征在于：包括如下操作步骤:
(1)取獭兔背部皮肤，剪成长条，置于Ⅱ型分离酶溶液中，于4℃过夜消化，次日于37℃培养箱中消化后，去除表皮；
(2)将经步骤(1)去除表皮处理后剩余的皮肤真皮部分剪碎成泥，置于D型胶原酶中消化4-6h，至消化皮肤呈液态并在显微镜下观察有毛乳头游离出，用含胎牛血清的DMEM终止消化；
(3)将经步骤(2)处理后的液态皮肤离心，收集细胞，弃去上清液，细胞培养基重悬，即得。
2.根据权利要求1所述的一种獭兔皮肤真皮毛乳头细胞分离培养方法，其特征在于：步骤(2)所述消化温度为37℃，消化时间为4-6h。
3.根据权利要求1所述的一种獭兔皮肤真皮毛乳头细胞分离培养方法，其特征在于：步骤(3)所述离心的具体操作步骤依次为：2000r/min离心4-6min，重复2次；500r/min离心2-4min，重复4次；2000r/min离心3-7min，重复2次；500r/min离心2-4min，重复4次。
4.根据权利要求3所述的一种獭兔皮肤真皮毛乳头细胞分离培养方法，其特征在于：步骤(3)所述离心的具体操作步骤依次为：2000r/min离心5min，重复2次；500r/min离心3min，重复4次；2000r/min离心5min，重复2次；500r/min离心3min，重复4次。
5.根据权利要求1所述的一种獭兔皮肤真皮毛乳头细胞分离培养方法，其特征在于：步骤(1)所述獭兔背部皮肤为25-35日龄獭兔背部皮肤。
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