[发明专利]筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子及其筛选方法在审
| 申请号： | 201810355455.3 | 申请日： | 2018-04-19 |
| 公开（公告）号： | CN108559715A | 公开（公告）日： | 2018-09-21 |
| 发明（设计）人： | 赵爱春;刘长英;龙定沛;胡杰;向仲怀 | 申请（专利权）人： | 西南大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/81;G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京同恒源知识产权代理有限公司 11275 | 代理人： | 赵荣之 |
| 地址： | 400715*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 二聚体 酵母转化子 筛选 桑树 蛋白 蛋白质 营养缺陷筛选 蛋白二聚体 编码基因 高效筛选 阳性克隆 成功 转化 应用 | ||
1.筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子，其特征在于，包括如下步骤：
1)将桑树β亚基和γ亚基的编码基因分别插入到将pBridge载体的MCS I和MCS II，重组质粒pBridge-βγ；
2)将步骤1)获得的重组质粒pBridge-βγ转化AH109酵母中，获得筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子。
2.根据权利要求1所述筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子，其特征在于：所述γ亚基为γ1亚基或γ2亚基。
3.利用权利要求1或2所述酵母转化自筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的方法，其特征在于，包括如下步骤：提取桑树RNA，反转合成cDNA，然后连接线性化的pGADT7载体，形成桑树文库质粒，然后将桑树文库质粒转入所述酵母转化子中，用SD-Trp-Leu-His-Met+5mM 3AT筛选阳性克隆子，然后阳性克隆中提取质粒，转化大肠杆菌后测序、分析得到与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述桑树文库的文库库容大于3×106CFUml-1，平均插入片段大于1200bp，阳性率为100％。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：筛选阳性克隆的方法如下，将转入文库质粒的筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子，涂于SD-Trp-Leu-His-Met+5mM3AT平板上，30℃恒温培养3～4天，在培养到第3天时，用无菌绒布对筛库平板进行影印清除后，继续培养20天，从筛库平板中挑取长出的阳性克隆单菌落，分别各挑取了初始阳性克隆转化子转接到SD-Trp-Leu-His-Met缺陷型平板中继续培养2～3天，最终获得了阳性克隆子。
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