[发明专利]一种工程菌及其在丹参素和α-酮戊二酸联产中的应用

权利要求书

1.一种重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌同时表达了外源L-谷氨酸脱氢酶、α-羟基羧酸脱氢酶和L-氨基酸氧化酶，并在宿主大肠杆菌的基础上敲除了酚类化合物分解相关的基因；

所述L-谷氨酸脱氢酶是NCBI上登录号为WP_000373021.1、WP_011338202.1、WP_003497202.1或WP_010886557.1的L-谷氨酸脱氢酶；

所述α-羟基羧酸脱氢酶是NCBI上登录号为WP_003643296.1、WP_002335374.1、或EEI22188.1的D-α-羟基羧酸脱氢酶，或NCBI上登录号为WP_013858488.1、WP_003607654.1或WP_035430779.1的α-羟基羧酸脱氢酶；

所述L-氨基酸氧化酶是NCBI上登录号为WP_004244224.1、OAT30925.1、EFE55026.1、WP_036414800.1或WP_026879504.1的L-氨基酸氧化酶；

所述酚类分解基因为原儿茶酸2,3-双加氧酶基因hpaD、2,3-二羟苯基丙酸盐1,2双加氧酶基因mhpB中的任意一种或者两种组合。

2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌还强化表达了谷氨酸转运基因、NAD合成基因、FAD合成基因中的一种或者多种。

3.根据权利要求2所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述强化表达的基因为谷氨酸转运基因gltS、NAD合成基因nadA、FAD合成基因ribF中的任意一种或多种。

4.根据权利要求2或3所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述强化表达是通过将宿主大肠杆菌基因组上所要强化表达的基因前增加组成型启动子。

5.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述L-谷氨酸脱氢酶、α-羟基羧酸脱氢酶、L-氨基酸氧化酶是通过pCOLADuet共表达的。

6.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述宿主大肠杆菌为大肠杆菌BL21(DE3)。

7.一种生产丹参素的方法，其特征在于，所述方法是利用权利要求1-3，5-6任一所述的重组菌。

8.一种生产丹参素的方法，其特征在于，所述方法是利用权利要求7所述的重组菌。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法是进行全细胞转化生产。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法是进行全细胞转化生产。

11.根据权利要求9或10所述的方法，其特征在于，所述全细胞转化生产的体系中，包括细胞湿重1-200g/L，左旋多巴1-200g/L，L-谷氨酸1-200g/L，pH 6.0-9.0；于15-40℃反应，时间1-48小时。