[发明专利]木兰科植物种子醇溶蛋白的酸性聚丙烯酰胺电泳分离方法

说明书

本发明属于电泳法技术领域，公开了一种木兰科植物种子醇溶蛋白的酸性聚丙烯酰胺电泳分离方法，所述木兰科植物种子醇溶蛋白的酸性聚丙烯酰胺电泳分离方法包括：木兰科植物种子中醇溶蛋白的提取、单向快速分离木兰科植物种子醇溶蛋白和固定、染色、脱色。本发明采用酸性聚丙烯酰胺电泳分离木兰科植物种子醇溶蛋白，简单易行；为不同种类木兰科植物种子的分类和鉴定提供了快速有效的手段。

技术领域

本发明属于电泳法技术领域，尤其涉及一种木兰科植物种子醇溶蛋白的酸性聚丙烯酰胺电泳分离方法。

背景技术

目前，业内常用的现有技术是这样的：木兰科植物多为高大的常绿乔木，特别因其花色艳丽，花香宜人，树姿优美多态，树叶、聚合果各具特色，是一类具有很高观赏价值的园林绿化树种。但木兰科植物种子的鉴定却是园林工人在选种时遇到的一大困难，如何快速地实现对木兰科植物种子进行鉴定，具有重要意义。醇溶蛋白是植物种子储存蛋白的组分之一，不能够溶于水，也不溶于无水乙醇，但溶于50％—90％的乙醇，所以人们通常采用乙醇为溶剂来提取醇溶蛋白。除此之外，也还可用丙三醇、丁二醇作为溶剂来提取醇溶蛋白。醇溶蛋白主要存在于植物中，其中以禾本科植物中醇溶蛋白最为丰富，至今对禾本科植物醇溶蛋白进行的相关研究很多，例如对小麦品种的研究，玉米醇溶蛋白的研究等。醇溶蛋白分析已被广泛应用于品种的鉴定、亲缘关系比较和遗传多样性研究等领域。本发明通过提取木兰科植物种子中的醇溶蛋白，使用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法分离醇溶蛋白，通过不同醇溶蛋白谱带来鉴定木兰科植物种子。聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)方法从1967年出现以来，迅速得到了推广运用。各国的研究者以聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法为基础根据自己实验室的实际情况，在凝胶配方、材料选择、溶液配制、电泳方法等等方面进行了诸多修改，使之更适合自己的实验目的和对象。通过不断修改完善，酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术成为了一种鉴定品种的标准方法，1986年，国际种子检验协会(ISTA)将酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳作为鉴定小麦、大麦品种的标准方法。目前，对于木兰科植物种子分类和鉴定研究中，通常以植物学形状特征作为鉴定方法，但在实际应用中，木兰科植物种子各品种间植物学特征相似的情况很多，对研究者的专业背景要求高，通过形态进行鉴定可行性不高。而利用与遗传相关的生理生化物质进行品种鉴定是较为简单、准确、快速的方法，但其难点是对于相关物质的提取分离。因此开发出快速分离这些生理生化物质的方法，对于快速品种鉴定意义重大。

综上所述，现有技术存在的问题是：在实际应用中，木兰科植物种子各品种间植物学特征相似的情况很多，对研究者的专业背景要求高，通过形态进行鉴定可行性不高。

解决上述技术问题的难度和意义：难点在于对木兰科植物醇溶蛋白的高效提取，对提取的醇溶蛋白采取合适的电泳体系进行有效分离；其意义在于通过对醇溶蛋白的有效提取和电泳分离，可以借助不同醇溶蛋白谱对木兰科不同种植物的种子进行快速鉴定。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种木兰科植物种子醇溶蛋白的酸性聚丙烯酰胺电泳分离方法。

本发明是这样实现的，一种兰科植物种子醇溶蛋白的酸性聚丙烯酰胺电泳分离方法，所述木兰科植物种子醇溶蛋白的酸性聚丙烯酰胺电泳分离方法包括：木兰科植物种子中醇溶蛋白的提取、单向快速分离木兰科植物种子醇溶蛋白和固定、染色、脱色。

进一步，所述木兰科植物种子中醇溶蛋白的提取具体包括：将胚乳在分析天平上称重，胚乳重：提取液体积按1:4比例加入由25％二氯乙醇+12％尿素+1％巯基乙醇配置而成的样品提取液研磨，之后震荡20分钟，随后在常温12000r/min条件下离心20min，所得上清液按照1：1比例加入40％的蔗糖溶液，在该样品中加入0.5％的甲基绿，常温储存备用。

进一步，所述单向快速分离木兰科植物种子醇溶蛋白具体包括：