[发明专利]木兰科植物种子醇溶蛋白的酸性聚丙烯酰胺电泳分离方法

权利要求书

1.一种木兰科植物种子醇溶蛋白的酸性聚丙烯酰胺电泳分离方法，其特征在于，所述木兰科植物种子醇溶蛋白的酸性聚丙烯酰胺电泳分离方法包括：木兰科植物种子中醇溶蛋白的提取、单向快速分离木兰科植物种子醇溶蛋白和固定、染色、脱色。

2.如权利要求1所述的木兰科植物种子醇溶蛋白的酸性聚丙烯酰胺电泳分离方法，其特征在于，所述木兰科植物种子中醇溶蛋白的提取具体包括：将胚乳在分析天平上称重，胚乳重：提取液体积按1:4比例加入由25％二氯乙醇+12％尿素+1％巯基乙醇配置而成的样品提取液研磨，之后震荡20分钟，随后在常温12000r/min条件下离心20min，所得上清液按照1：1比例加入40％的蔗糖溶液，在该样品中加入0.5％的甲基绿，常温储存备用。

3.如权利要求1所述的木兰科植物种子醇溶蛋白的酸性聚丙烯酰胺电泳分离方法，其特征在于，所述单向快速分离木兰科植物种子醇溶蛋白具体包括：

(1)采用循环水冷却电泳仪进行垂直板酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳，压条封边后，将在4℃冰箱冷却的聚丙烯酰胺母液配制分离胶浓度5％，pH 3.1丙烯酰胺分离胶灌注至梳子下端1.5cm处，用超纯水液封，凝胶半小时以上；

(2)弃去分离胶上的超纯水，将聚丙烯酰胺母液配制浓缩胶浓度12％，pH 4.2丙烯酰胺浓缩胶，插入长城齿梳子，凝胶半小时以上；

(3)用乳酸铝电极缓冲液在120V恒压电泳约40min，前沿指示剂到达分离胶后变换电压为200V，恒压电泳3h。

4.如权利要求1所述的木兰科植物种子醇溶蛋白的酸性聚丙烯酰胺电泳分离方法，其特征在于，所述固定、染色、脱色具体包括：电泳结束后，取下玻璃板，沿一角将玻璃板撬开，把凝胶剥离下来放在培养皿内，倒入固定液，放在摇床上固定半小时；固定半小时后再倒入考马斯亮蓝染色液进行染色，染色时间2小时；染色完成后，进行脱色，脱色时间通常为两小时，将脱好色的胶取出放在透明光板上，用扫描仪进行扫描，防止条带扩散。