[发明专利]一种人视网膜Muller细胞的分离及培养方法

说明书

本发明提供了一种原代人视网膜Muller细胞的分离及培养方法，包括以下步骤：(1)无菌取出角膜捐献者手术切除的正常眼球；(2)解剖显微镜下，无菌剥离视网膜组织；(3)加入混合胶原酶消化；(4)终止消化，过滤，离心，洗涤，用完全培养基重悬，接种培养瓶；(5)置于37℃，5%CO₂培养箱培养；(6)细胞传代和纯化；(7)细胞形态观察与鉴定。本发明提供的一种人视网膜Muller细胞的分离及培养方法，操作简单，稳定，高效，为进一步研究视网膜病变损伤发生机制提供了良好的实验材料。

技术领域

本发明属于现代生物技术之细胞培养技术领域，具体涉及一种人视网膜Muller细胞的分离及培养方法。

背景技术

Muller细胞由德国人Müller（1851）首先描述，后以其名字命名。由于呈细长形似纤维，又称Muller纤维。其胞体向内外发出细长的突起占据从内界膜至外界膜的整个视网膜厚度，包绕着视网膜中视锥视杆细胞，双极细胞及神经节细胞的大部分神经元，特化的足板附于视网膜毛细血管壁参与构成血—视网膜屏障。 Muller细胞是脊椎动物视网膜内最主要的神经胶质细胞。它贯穿整个视网膜，与视网膜神经细胞及视网膜血管发生多种功能的交互作用。糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy，DR）的发病机制至今尚未明，近年来的临床和基础研究发现DR患者和动物模型中Muller细胞超微结构和生理功能发生了变化，Muller细胞的这些变化在DR的发生发展中起重要作用，这种变化早于视网膜血管损伤。因此用定量分析的方法深入探讨Muller细胞在DR发生发展中的作用及机制，延缓或逆转其结构及功能异常成为预防与治疗DR的热点，并且已经有学者提出通过移植Muller细胞来治疗DR的建议。

目前，国内外可供应的人视网膜Muller细胞很少且有关体外正常视网膜Muller细胞培养方法的研究甚少，而且多数方法不稳定，再加上眼球组织不容易获取，严重制约了后续的研究工作。本研究通过多次操作实践，使用混合胶原酶联合消化法分离Muller细胞，成功率高，采用消化传代的方法进行纯化，同时培养基中加入适当生长因子可促进Muller细胞增殖。本发明旨在提供一种操作简单、稳定高效的视网膜Muller细胞分离方法，建立一套完整可靠的正常人视网膜Muller细胞体外培养技术。

发明内容

根据上述问题，本发明提供了一种人视网膜Muller细胞的分离及培养方法，该方法操作简单，细胞产量和纯度高，是一种较为理想的人视网膜Muller细胞原代培养方法，可以满足多种生理生化实验的要求。